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本研究对氨苄青霉素(AMP)的免疫原性、人工抗原合成、多克隆抗体(pAb)和单克隆抗体(mAb)制备及其特性和试剂盒研制及其性能等进行了研究。在分析AMP分子结构和免疫原性基础上,利用AMP上的羧基和氨基,分别用碳化二亚胺化法(EDC)和戊二醛法(GA)将AMP偶联于牛血清白蛋白(BSA)和鸡卵清蛋白(OVA),合成人工免疫原BSA-EDC-AMP、BSA-GA-AMP和包被抗原OVA-EDC-AMP、OVA-GA-AMP,通过紫外(UV)、SDS-PAGE和免疫小鼠后抗血清的ELISA鉴定,BSA-EDC-AMP和BSA-GA-AMP偶联成功,分子结合比为8:1和15:1,获得了高价、敏感、特异的抗血清。但经过对两种免疫原的阻断ELISA检测,BSA-EDC-AMP的抑制效果优于BSA-GA-AMP,然后用BSA-EDC-AMP免疫新西兰白兔,其间接ELISA效价为1:6.4×105,阻断ELISA测定半数抑制浓度(IC50)为31.6μg/mL,与邻氯青霉素的交叉反应率(CR%)为39.4%,与其它化合物的CR<0.5%,琼脂双扩散实验结果表明产生了针对AMP的特异性抗体。用BSA-EDC-AMP免疫Balb/C小鼠,免疫后用间接ELISA和阻断ELISA选择出细胞融合备用小鼠,应用细胞融合技术筛选出1C8、2H6、3F9和3G7共4株敏感特异的杂交瘤细胞,用体内诱生腹水法制备AMP mAb,经鉴定,其间接ELISA效价细胞培养上清分别为1:6.4×102、1:3.2×102、1:1.28×103、1:3.2×102,腹水分别为1:3.2×105、1:5.12×105、1:8.1×105、1:6.4×105,同种型分别为IgG2a/λ、IgG2a/κ、IgG1/κ、IgG1/λ,亲和常数(Ka)分别为4.49×108、5.16×108、2.06×109和9.81×108 L/mol,其中亲和力最高的3F9株阻断ELISA测定其IC50为5.2 ng/mL,与邻氯青霉素的CR%为18.6%,与其他化合物的CR<0.5%。本实验制备的AMP pAb和AMP mAb均可用于AMP残留检测的免疫学试验,AMP mAb更好。应用AMP mAb研制出AMP残留快速检测阻断ELISA试剂盒的质量性能更好,AMP-Kit的标准曲线呈S型,符合4参数logit曲线拟合,灵敏度为1.7 ng/mL,线性检测范围为1.7～165.0 ng/mL;牛奶样、猪尿样和饲料样的平均添加回收率分别为101.3%、102.4%和106.7%,平均批内和批间变异系数均小于15%;AMP-Kit与邻氯青霉素的CR%为21.1%,与其他化合物的CR<0.5%。不同生物基质对AMP-Kit的检测结果影响不大;AMP-Kit在4℃可保存6个月以上。