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目的:探索灵菌红素（Prodigiosin,PG）在胆管癌细胞中所发挥的作用,为临床治疗胆管癌提供新的治疗药物。方法:首先通过CCK-8实验检测胆管癌细胞系在不同浓度的灵菌红素作用下的细胞存活率。采用CCK-8、平板克隆形成实验、EDU实验检测不同浓度的灵菌红素对胆管癌细胞TFK-1和Hu CCT-1增殖能力的影响。Western blot实验和流式细胞术检测不同浓度的灵菌红素对胆管癌细胞凋亡作用的影响。进一步通过Western blot实验、透射电子显微镜、m RFP-GFP-LC3双荧光检测灵菌红素对胆管癌细胞内自噬通量的影响。通过使用二甲基亚砜（DMSO）、自噬激动剂雷帕霉素（Rap）、自噬抑制剂氯喹（CQ）、灵菌红素作用胆管癌细胞后检测自噬流量的变化,同时Western blot实验检测SNAREs复合体蛋白表达的变化。随后采用Western blot实验、透射电子显微镜、m RFP-GFP-LC3双荧光检测当SNAREs复合体中STX17和SNAP29过表达后灵菌红素对胆管癌细胞内自噬通量的影响。通过CCK-8、平板克隆形成实验、EDU实验检测STX17和SNAP29过表达后灵菌红素对胆管癌细胞增殖能力的影响。Western blot实验和流式细胞术检测STX17和SNAP29过表达后灵菌红素对胆管癌细胞凋亡作用的影响。构建细胞系肿瘤移植模型验证灵菌红素在体内对胆管癌细胞增殖能力的影响,并检测灵菌红素对裸鼠主要器官的毒性作用。结果:CCK-8结果显示随着灵菌红素浓度的增加,胆管癌细胞系TFK-1、Hu CCT-1、Hu H28、QBC939、RBE、CCLP-1的存活率逐渐下降。CCK-8、平板克隆形成实验、EDU实验结果显示随着灵菌红素浓度的增强,Hu CCT-1和TFK-1的增殖能力逐渐降低,差异具有统计学意义。流式细胞术结果显示随着灵菌红素浓度的增加,Hu CCT-1和TFK-1的凋亡率显著增加,差异具有统计学意义。Western blot实验显示随着灵菌红素浓度的增加,Hu CCT-1和TFK-1的凋亡蛋白表达逐渐上升,而自噬蛋白表达逐渐下降,差异具有统计学意义。透射电子显微镜、m RFP-GFP-LC3双荧光结果显示与DMSO组相比,灵菌红素组的自噬溶酶体数量逐渐下降,自噬流量GFP-LC3B升高而m RFP-LC3B下降,差异具有统计学意义。m RFP-GFP-LC3双荧光结果显示与DMSO组比较,灵菌红素组、氯喹组的GFP-LC3B荧光表达上升,而雷帕霉素组GFP-LC3B荧光表达下降,灵菌红素+氯喹组的GFP-LC3B较单独灵菌红素组、氯喹组的荧光表达比例明显上升。Western blot实验结果显示随着灵菌红素浓度的增加,Hu CCT-1和TFK-1的自噬蛋白STX17和SNAP29的表达逐渐下降,自噬底物蛋白p62表达逐渐上升,而各组间的自噬蛋白VAMP8的表达无差异。进一步Western blot实验显示与对照组相比,过表达STX17或SNAP29后Hu CCT-1和TFK-1的自噬蛋白LC3B和P62表达明显降低,而灵菌红素+过表达STX17组或灵菌红素+过表达SNAP29组的LC3B和P62表达均有不同程度增加,差异具有统计学意义。m RFP-GFP-LC3双荧光结果显示,与对照组相比,过表达STX17或SNAP29后TFK-1的GFP-LC3B荧光表达明显下降,而灵菌红素+过表达STX17组或灵菌红素+过表达SNAP29组的GFP-LC3B荧光表达均有不同程度增加,差异具有统计学意义。透射电子显微镜结果显示与对照组相比,过表达STX17或SNAP29后TFK-1的自噬溶酶体数量进一步增加,相反灵菌红素+过表达STX17组以及灵菌红素+过表达SNAP29组的自噬溶酶体数量明显降低,差异具有统计学意义。CCK-8、平板克隆形成实验、EDU实验结果显示与对照组相比,过表达STX17或SNAP29后Hu CCT-1和TFK-1的增殖能力增强,而灵菌红素+过表达STX17组或灵菌红素+过表达SNAP29组的增殖能力有所下降,差异具有统计学意义。流式细胞术结果显示过表达STX17或SNAP29后Hu CCT-1和TFK-1的凋亡率降低,而灵菌红素+过表达STX17组或灵菌红素+过表达SNAP29组的凋亡率上升,差异具有统计学意义。Western blot实验结果显示过表达STX17或SNAP29后Hu CCT-1和TFK-1的凋亡蛋白表达水平降低,而灵菌红素+过表达STX17组或灵菌红素+过表达SNAP29组的蛋白表达水平增高,差异具有统计学意义。体内实验结果显示与DMSO组相比,灵菌红素组的TFK-1皮下成瘤能力显著下降,裸鼠瘤体中的增殖因子PCNA、Ki-67染色阳性率减少,而自噬蛋白LC3B和p62染色阳性率增加,差异具有统计学意义。裸鼠器官H＆E染色显示PG组与DMSO组无明显变化。结论:灵菌红素通过下调SNAREs依赖性自噬进而抑制胆管癌细胞的增殖并诱导细胞凋亡。