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第一部分及第二部分目的:膀胱肿瘤是泌尿生殖系最常见的肿瘤,尤其在我国,其发病率和死亡率均占泌尿系肿瘤首位。膀胱癌中90%是移行细胞癌,且进展率和复发率高[1]。如果肿瘤只局限在原发部位,经手术切除即可治愈。目前治疗失败的主要原因是发生远处转移或者膀胱壁多发转移,膀胱癌一旦转移,对放、化疗敏感性差,治疗起来非常棘手。所以,加强对膀胱癌转移的分子机制的研究尤为迫切。色素框同源物7（Chromobox homolog 7,CBX7）属于色素框家族,其表达和功能在胰腺癌等多种肿瘤存在显著异常。本研究拟检测CBX7基因在膀胱癌组织中的表达,明确其表达发生改变的原因;构建表达载体,上调膀胱癌T24细胞中CBX7蛋白的表达,检测CBX7高表达对T24细胞侵袭的影响。方法:荧光定量PCR检测45例膀胱癌组织表达中的CBX7 mRNA表达。Miranda等软件预测能够调控CBX7基因的microRNA。检测miR-9前体对CBX7基因表达的影响。荧光定量PCR检测膀胱癌组织中miR-9表达。应用荧光素酶报告基因表达分析明确miR-9是否与CBX7基因3’UTR结合,负性调控CBX7基因的表达。pcDNA-CBX7转染膀胱癌T24细胞,CBX7的表达由荧光定量PCR和Western blotting检测。CBX7基因过表达的T24细胞的侵袭能力由Transwell小室法检测,并应用Western blotting检测CBX7基因过表达的T24细胞中血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）以及基质金属蛋白酶2（matrix metalloproteinase,MMP2）的表达改变。结果:1、CBX7 mRNA在膀胱癌组织中的表达。CBX7 mRNA在45例膀胱癌组织表达中的表达显著低于其在癌旁正常组织中的表达,而且在侵袭性膀胱癌组织中的表达显著低于浅表性膀胱癌。2、miR-9在转录后水平负性调控CBX7基因表达。应用Miranda等软件,预测CBX7基因是miR-9的靶基因,在CBX7mRNA-3’UTR有miR-9结合位点。荧光定量PCR检测发现,与癌旁正常组织相比,膀胱癌组织中miR-9表达明显增加。而且CBX7与miR-9的表达水平呈明显负相关。miR-9前体能够显著降低CBX7基因的表达。荧光素酶报告基因表达分析证实miR-9能够与CBX7基因3’UTR结合,负性调控CBX7基因的表达。3、CBX7基因抑制膀胱癌T24细胞的侵袭能力荧光定量PCR和Western blotting检测证实,pcDNA-CBX7能够显著上调T24细胞中CBX7基因的表达。CBX7高表达显著降低了膀胱癌T24细胞的侵袭能力,而且显著下调了膀胱癌T24细胞中MMP-2和VEGF蛋白的表达。结论:1 CBX7基因在膀胱癌中表达显著下调,在侵袭性膀胱癌中下调更为显著,CBX7基因与膀胱癌的发生和侵袭相关。2、miR-9能够通过与CBX7基因3’UTR特定序列靶向结合并负性调控CBX7基因的表达。3、miR-9在膀胱癌中表达显著上调,CBX7基因与miR-9的表达水平呈显著地负相关,miR-9的表达上调是CBX7基因在膀胱癌特别是侵袭性膀胱癌中表达下调的原因之一。4、CBX7基因过表达能够显著抑制膀胱癌细胞的侵袭能力,并能够下调转移相关基因MMP-2和VEGF的表达,具有膀胱癌转移抑制基因的作用。第三部分目的:探讨长链非编码RNA CDKN2B antisense RNA 1（CDKN2B-AS）基因在膀胱尿路上皮癌（bladder urothelial carcinoma,BUC）中的表达及其对吉西他滨敏感性的影响。方法:用实时定量PCR检测CDKN2B-AS基因的表达。用增强型CCK-8法检测膀胱癌细胞的增殖能力和吉西他滨的半数抑制浓度（half maximal inhibitory concentration,IC50）。用Annexin V-FITC/PI双染色凋亡试剂盒检测细胞凋亡率。用Western blotting检测蛋白表达。应用TOP/FOP荧光素酶法检测Wnt信号通路的活性。结果:与癌旁正常尿路上皮组织和SV-HUC-1细胞相比,CDKN2B-AS基因在BUC组织和J82、T24细胞中高表达,差异有显著性。CDKN2B-AS基因的高表达与BUC组织病理分级高、吉西他滨敏感性低有关。CDKN2B-AS基因在吉西他滨耐药的T24/GEM细胞中的表达明显高于T24细胞。CDKN2B-AS基因敲除增强了T24/GEM细胞吉西他滨的敏感性,并促进吉西他滨诱导的细胞毒作用。CDKN2B-AS基因敲除能够使Wnt信号通路失活,Wnt信号通路介导了CDKN2BAS敲除对T24/Gem细胞的吉西他滨敏感性的影响。结论:lnc RNA CDKN2B-AS在BUC中高表达,与BUC对吉西他滨的敏感性低有关。CDKN2B-AS通过Wnt信号通路抑制BUC中吉西他滨的敏感性。