【摘 要】
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目的：通过建立新生大鼠脑皮层神经元缺氧复氧模型,探讨缺氧复氧不同时间点对神经元线粒体内细胞色素C氧化酶(COX)活性的影响,以及还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)对神经元线
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目的：通过建立新生大鼠脑皮层神经元缺氧复氧模型,探讨缺氧复氧不同时间点对神经元线粒体内细胞色素C氧化酶(COX)活性的影响,以及还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)对神经元线粒体细胞色素C氧化酶的保护作用。
方法：原代培养新生24h内的Wister大鼠脑皮层神经元,用免疫细胞化学方法进行神经元细胞鉴定,取生长状态良好的细胞随机分成三组:1.正常对照组:继续在培养箱内培养;2.缺氧复氧组:将样本移入密闭自制玻璃缺氧盒,连续通入5％CO2+95％N2混合气,持续通气30min,完全置换出容器内的原有空气,维持一定的湿度,封闭缺氧盒置于37℃恒温箱内培养6h,然后将样本放回培养箱进行复氧,分别复氧:6h、12h、24h、48h和72h;3.NADH组:按照上述方法进行缺氧后在培养液中分别加入终浓度为400μg/ml的NADH,分别放回培养箱,进行与上述相同的复氧过程。利用线粒体细胞色素C氧化酶试剂盒在酶标仪下分别检测正常对照组,缺氧复氧组和NADH组在复氧6h、12h、24h、48h和72h这五个时间点的吸光度,计算各组不同时间点线粒体COX的相对活性,检验各试验组间线粒体COX活性的差异。
结果：NADH组的线粒体COX活性普遍大于缺氧复氧组(P＜0.05)具有显著性差异,以复氧6h组较为明显(P＜0.01)具有显著性意义,但72h缺氧复氧组和NADH组COX活性无明显差异(P＞0.05),考虑与NADH代谢有关,本实验证实NADH对线粒体COX有保护作用,
结论：缺氧复氧造成线粒体COX活性的下降,NADH对缺氧复氧造成的线粒体COX损伤有保护作用,在复氧6h内给予NADH对线粒体COX保护作用明显。
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