富血小板纤维蛋白膜对大鼠再植牙牙周愈合影响的实验研究

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研究目的:  外伤牙齿全脱位在前牙外伤中发病率高,治疗难度大,预后不稳定。如何改善再植牙牙周微环境,控制再植牙牙根吸收,促进再植牙牙周膜愈合一直是牙外伤领域亟待解决的课题之一。  富血小板纤维蛋白(platelet-rich fibrin,PRF)是从血液中提取的第二代富含血小板、白细胞的生物材料,具有良好的生物学性能。研究表明PRF能够促进包括牙周组织在内的多种软、硬组织损伤的再生及修复。但由于全脱位牙再植的修复过程易受多种因素影响,且将PRF用于牙再植术的实验研究较少,牙再植术应用PRF后,牙周组织的反应情况及相关作用机制也尚不清楚。  本实验以大鼠上颌第一磨牙原位再植作为实验模型,自体心脏采血体外制备PRF膜,脱位牙复合PRF膜原位再植,观察局部应用PRF膜后,再植牙愈合过程,组织修复反应以及破骨细胞(osteoclast,OC)表达情况,探讨PRF对全脱位牙再植后牙周愈合的影响,为进一步实验研究及临床应用奠定理论基础。  方法:  (1) PRF膜制备及组织学观察:采用自体心脏采血法,提取PRF,压制成膜状;制作石蜡标本,进行苏木素-伊红(Hematoxylin-Eosin,HE)染色,光学显微镜下观察其组织学形态结构。  (2)全脱位牙再植实验动物模型建立及组织学观察:75只6w龄Wistar大鼠,随机分为即刻组、30min干燥保存组、60min干燥保存组,每组25只大鼠。拔除双侧上颌第一磨牙,每组随机选取一侧脱位牙复合PRF膜进行原位再植作为PRF膜实验组,对侧脱位牙直接原位再植作为对照组。分别于术后1d、3d、7d、14d、28d采用心内灌流固定法处死3组各5只大鼠。取上颌骨,制备标本,切片,HE染色,光学显微镜下观察牙再植术后牙周情况。  (3) OC表达检测:大鼠上颌骨标本切片,采用抗酒石酸酸性磷酸酶染色法(tartrate resistant acid phosphatase,TRAP)染色,观察PRF膜对牙再植术后牙周OC表达的影响。  结果:  (1) PRF膜组织学观察:采用的心脏采血法可以成功提取PRF,PRF呈凝胶状,表面光滑,质韧有弹性,可体外塑形成膜状。组织学观察证实PRF膜主体为HE红染的胶原,其周缘可见富集的蓝染白细胞,白细胞周缘可见薄层血小板、红细胞富集,胶原表面可见压制附着的白细胞及血小板。  (2)再植牙牙周组织学观察:所有再植牙无脱落。牙再植术后早期牙周组织炎症细胞浸润,后期牙周重建性修复反应与破坏性修复反应并存。即刻再植PRF膜组中,再植早期炎症细胞趋化延缓,炎性浸润持续时间延长,不利于远期牙周组织修复愈合;30min干燥再植组,添加PRF膜,促进再植早期炎症细胞趋化,有助于抑制炎症性根吸收发生、发展;60min干燥保存组,添加PRF膜,有助于抑制替代性吸收的发生。  (3)再植牙牙周OC表达:再植术后1天即可在牙槽骨骨髓腔及血管腔处检测到TRAP染色阳性的OC,随术后时间延长逐渐向牙根面迁移。即刻组,对照组根面OC表达量7d达峰值,PRF膜组14d达峰值,添加PRF膜能够延缓OC迁移、表达。30min干燥保存组中,PRF膜组及对照组OC表达趋势与即刻组PRF膜组、对照组相似,对照组OC表达在7d达峰值,PRF膜组14d达峰值。60min组,PRF膜组与对照组OC表达量均在14d达峰值。  结论:  添加PRF膜不影响再植牙就位。对于即刻牙再植,应用PRF尚不能改善再植牙牙周膜愈合;对于延迟再植牙,应用PRF能够减少炎症性吸收及替代性吸收的发生。应用PRF能够调节再植牙根面OC表达。
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