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目的:通过RNA干扰(RNAi)技术抑制大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E) Omi/HtrA2蛋白的表达,观察NRK-52E在缺氧/复氧损伤后发生凋亡的改变,探讨Omi/HtrA2在NRK-52E凋亡中的作用及机制。方法:实验分为5组:正常组(常规培养组),模型组(缺氧/复氧组),HK组(转染重组质粒Pgenesil-1/HK组),shRNA1组(转染Pgenesil-1/Omi/HtrA2 shRNA1组),shRNA2组(转染Pgenesil-1/Omi/HtrA2 shRNA2组),每组5瓶(75ml培养瓶)细胞。把NRK-52E接种到6孔板中,细胞融合度达到50%-60%时,进行转染,转染8小时后换用完全培养基培养,24小时后在荧光显微镜下可以观察到转染细胞,用含G418(300μg/ml)培养基进行筛选。获得抗性稳定的单克隆细胞后扩大培养,G418(150μg/ml)维持。除正常组外,各组细胞于无氧液中,缺氧环境(N295%+O21%+CO25%)下培养1小时,再用完全培养基常规培养12小时,制作缺氧/复氧模型。模型制作成功后收集各组细胞比较各组细胞凋亡情况:用DNA Ladder及Tunel检测各组细胞发生凋亡的情况;用Western blot检测各组Omi/HtrA2、caspase3的表达。结果:在倒置荧光显微镜下可以观察转染组细胞均可见绿色荧光。分析Western blot结果进行显示:与模型组相比,shRNA1组和shRNA2组Omi/HtrA2、caspase3蛋白表达明显减少(P<0.05)。DNA Ladder显示:模型组电泳呈现典型的梯度条带,shRNA1组和shRNA2组条带较模型组不明显; Tunel结果显示shRNA1组和shRNA2组较模型组阳性细胞数减少。结论:Omi/HtrA2在NRK-52E凋亡中发挥重要作用,抑制Omi/HtrA2表达可以减轻缺氧/复氧引起的NRK-52E的凋亡。