抗CD226单克隆抗体治疗NOD鼠自身免疫性糖尿病的研究

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1型糖尿病是一种主要由T细胞介导的特异性针对胰岛β细胞的自身免疫性疾病。在遗传易感因素和环境因素的共同作用下,胰岛β细胞损伤并释放自身抗原,这些自身抗原被抗原提呈细胞识别并提呈,继而产生抗原特异性CD4+和CD8+T细胞,从而特异性杀伤胰岛β细胞,使得胰岛素分泌能力短时间内丧失,同时胰岛细胞内自身抗原的暴露和释放使得B淋巴细胞产生相应的自身抗体。CD4+T细胞激活后分化成不同的细胞亚群,包括Th1、Th2、Th17以及Treg等。其中Th1细胞通过分泌IFN-γ等细胞因子来破坏胰岛β细胞,从而加快1型糖尿病的自然病程。Th2细胞主要分泌IL-4、IL-10,对于1型糖尿病具有保护作用。而Th17细胞主要通过分泌IL-17损伤胰岛β细胞。调节性T细胞在维持机体免疫自稳以及外周耐受的过程中发挥重要的角色,其数量以及功能的缺陷可能是人类1型糖尿病发生的一个重要的原因。自身反应性CD8+的T细胞能通过FAS/FASL或穿孔素/颗粒酶途径发挥对胰岛β细胞的直接杀伤;也可以通过分泌一些游离的小分子物质,例如炎性细胞因子,包括IFN-γ、TNF-α,自由基或者活性氧成分从而杀伤胰岛β细胞。GWAS研究发现,T细胞活化时一些共刺激信号通路中的等位基因变异包括CTLA-4/CD86以及CD226与发生T1D以及MS等自身免疫性疾病的高风险性相关。CD226分子属于免疫球蛋白超家族成员之一,它主要表达在活化的CD4+T细胞、CD8+T细胞、NK细胞以及单核细胞和血小板表面,其与配体CD155相互作用之后产生的共刺激信号能够促进T细胞的活化与增殖。除此以外,CD226分子还参与了 CD8+T细胞介导的细胞毒作用、促进Th1细胞的极化以及IFN-γ的产生、增强NK细胞对于靶细胞的杀伤作用等。CD226分子与自身免疫性疾病的关系非常密切,抗CD226单克隆抗体已应用于实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)以及多发性硬化等动物模型的研究,并且能够明显缓解病情的发展。然而,CD226在1型糖尿病中的作用以及阻断CD226之后是否能够预防或延缓1型糖尿病的发展目前尚未明确。本研究中,我们首先观察了 CD226在NOD鼠不同细胞亚群中的表达,结果显示CD226高表达在致病性的Th1、Th17亚群中,并且随着NOD鼠病程的进展而逐渐增加,这提示我们CD226的高水平表达可能与1型糖尿病的发生存在紧密的联系。接着我们在NOD鼠模型中应用抗CD226单克隆抗体干预治疗,得到了如下结果:1.抗CD226单克隆抗体治疗后能够明显缓解NOD鼠胰岛炎的发生。2.阻断CD226共刺激信号后能够抑制非特异性免疫应答,包括抑制Th1、Th17以及杀伤性T细胞分泌炎性细胞因子。3.减少抗原特异性致病性T细胞的产生。4.阻断CD226共刺激信号后能够明显抑制CD4+、CD8+T细胞的增殖。5.抗CD226单克隆抗体能够明显增加调节性细胞因子IL-10的分泌以及Treg细胞的比例,并且能够通过增加TIGIT+的Treg亚群比例、下调CD226+TIGIT-的Treg亚群而增强Treg的稳定性和免疫抑制功能。总之,在NOD鼠模型中应用抗CD226单克隆抗体能够抑制Th1、Th17亚群分泌炎性细胞因子IFN-γ以及IL-17,减轻CD8+T细胞分泌IFN-γ对自身组织的杀伤,减少抗原特异性T细胞的产生,上调Treg亚群的比例以及调节性细胞因子IL-10的分泌以增强免疫调节功能,缓解胰岛炎症细胞的浸润,从而为1型糖尿病的治疗提供了新的选择。
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