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miR-141-3p是miR-200家族中的重要一员,位于染色体12p13.31位点,其表达水平人类的不同癌症中存在差异。本研究小组前期通过miRNA PCR基因芯片筛选发现miR-141-3p基因在肺腺癌里呈高表达,但miR-141-3p对肺腺癌细胞的恶性生物学行为有何调控作用,以及具体相关机制尚未完全清楚。而且有研究证实,miR-141-3p在不同的肿瘤细胞中参与了增殖、转移、侵袭、凋亡等生物学行为,但关于肺癌细胞生物学特性相关文献并没有完全阐明,在肺腺癌里的研究也鲜有报道。同时为了探索miR-141-3p的相关机制,我们通过生物信息学分析和癌症基因组图谱(TCGA)数据集查阅,初步筛选了 UBAP1、MALAT1、KLF12、STAT4、PTEN这几个靶基因来研究miR-141-3p在肺腺癌中的重要调控机制,因此,本课题拟采用Real-time PCR技术验证miR-141-3p在肺腺癌中的表达水平,采用RT-qPCR技术、细胞功能学实验、蛋白质印迹技术(western-blot)探讨miR-141在肺腺癌中的恶性生物学行为以及与靶基因的相关性,同时分析miR-141-3p的表达与临床病病理参数之间的关系,旨在为肺腺癌的发生机制提供新的线索,也为肺腺癌的早期诊断和治疗提供更有效的靶点。[目的]1.收集并筛选标本,扩大样本量,通过RT-qPCR技术进一步验证miR-141-3p在肺腺癌中的表达量。2.选取并培养细胞系,采用RNA干扰技术敲低和过表达miR-141-3p的表达水平,探索并分析miR-141-3p在肺腺癌细胞的主要调控作用。3.采用RT-qPCR技术和蛋白印迹(western-blot)技术初步探索并分析肺腺癌细胞中miR-141-3p的表达变化及与靶基因的相关性。4.分析miR-141-3p与已筛选靶基因的相关性,以及miR-141-3p表达水平与临床病理参数之间的关系。[方法]1.选取昆明医科大学第三附属医院胸心外科2017年01月～2018年12月手术切除的肺腺癌组织及正常肺组织各30例,患者均无化疗药物使用史。术前临床诊断和术中冰冻切片诊断结果一致。正常组织离癌组织5cm以上,组织块小于0.5cm。根据WHO标准,用苏木精和伊红(H&E)染色组织病理学评估确定肿瘤类型和恶性程度。选取的患者均签署知情同意书,并经医院伦理委员会批准同意。组织入选标准为:①手术切除标本经病理诊断为肺腺癌②术前未经过抗肿瘤治疗经手术切除,切缘为阴性。标本收集后,浸泡于含RNAlater液的冻存管中,先放置于4°冰箱,过夜后转移至-80℃冰箱中保存,备用。2.通过RT-qPCR技术筛出肺腺癌胞系,利用RNAi干扰技术敲低或过表达miR-141-3p的表达水平,每个细胞系分别设立空白组、阴性对照(Negative control,NC)组、实验组,行细胞增殖实验、划痕实验、克隆实验、侵袭实验,观察组间的恶性生物学行为是否有差异。3.采用RT-qPCR技术筛选出与miR-141-3p相关性高的靶基因。4.用Western-blot测定RNAi干扰后细胞与已筛选靶基因蛋白的表达相关性。5.通过RT-qPCR技术分析组织样本miR-141-3p的表达水平、已筛出靶基因的表达水平及两者的相关关系。6.应用SPSS19.0软件包进行统计与分析,细胞各组间实验数据均以均数±标准差(x±s)表示,多组间比较用单因素方差分析。组织样本RT-qPCR所得数据用中位数表示,比较miRNA的表达与其下游靶基因的关系用Spearman test;比较miRNA以及mRNA的表达水平与年龄、性别、地区、肿瘤大小、TNM分期、淋巴结转移等临床病理资料的关系用Chi-Square test,计数资料以整数表示,以P<0.05为存在统计学差异。[结果]1.miR-141-3p 在 XWLC-05、YTMLC、A549 细胞中高表达;在 H157 细胞中低表达。2.敲低miR-141-3p可抑制XWLC-05细胞的增殖、侵袭、伤口愈合和克隆能力;敲低miR-141-3p可抑制A549细胞的侵袭和伤口愈合能力,但对增殖及克隆能力无明显影响;过表达miR-141-3p可促进H157细胞的增殖、侵袭、伤口愈合和克隆能力。3.在mRNA水平,XWLC-05细胞中敲低miR-141-3p致使PTEN和UBAP1表达量均升高,A549细胞中敲低miR-141-3p致使PTEN表达量升高,UBAP1表达量无明显变化,H157细胞中过表达miR-141-3p后PTEN表达水平降低,UBAP1表达水平稍升高,但无明显变化。4.在蛋白表达水平,XWLC-05、A549细胞中敲低miR-141-3p致使PTEN和UBAP1表达量均升高;过表达H157细胞中的miR-141-3p使PTEN和UBAP1表达量均降低。5.肺腺癌组织中miR-141-3p的表达水平高于正常组织(P=0.0138);肺腺癌组织与正常组织中PTEN的表达水平存在差异,且具有统计学意义,正常组织高于癌组织(P=0.0260);而UBAP1在肺腺癌组织和正常组织中的表达差异无统计学意义(P=0.2887)。肺腺癌组织中miR-141-3p的表达水平与PTEN表达水平有负相关性(r=-0.3190,P=0.0212);非宣威地区组织中miR-141-3p的表达水平与PTEN 及 UBAP1 表达水平存在负相关关系(r=-0.2225,P=0.1128)。miR-141-3p的表达水平与患者年龄、性别、地区、临床分期、原发灶大小及淋巴结转移之间均无明显相关性(p>0.05),PTEN的表达水平与患者年龄、性别、地区、分期、原发灶大小、淋巴结转移之间均无明显相关性(p>0.05)。[结论]1.在细胞水平上,miR-141-3p在肺腺癌中有促癌基因的作用,能促进肺腺癌细胞的增殖、侵袭、伤口愈合、克隆能力。2.在分子水平上,miR-141-3p可通过抑制PTEN表达进而促进肺腺癌细胞的恶性生物学行为;miR-141-3p仅在蛋白质水平对UBAP1有调控作用。3.在组织水平上,miR-141-3p在肺腺癌组织的表达水平高于正常组织。肺腺癌组织中miR-141-3p及PTEN的表达水平与临床病理参数之间无明显相关性。