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研究目的:探讨NFκB信号通路抑制剂ACT001在乳腺癌他莫昔芬耐药中的作用及机制。研究方法:选取MCF7、T47D以及ZR7530细胞系作为研究细胞。MTT法检测他莫昔芬、ACT001单药以及ACT001联合他莫昔芬对乳腺癌细胞增殖能力的抑制作用。二维克隆实验研究不同药物对细胞克隆形成能力的影响。慢病毒包被,导入荧光凋亡蛋白VC3AI,通过荧光显微镜观察绿色荧光来观察细胞凋亡情况。Annexin V-FITC/PI双染通过流式仪检测细胞凋亡率。慢病毒包被转导NFκB信号通路关键蛋白突变质粒(p CDH-CMV-IKBα(S32A,S262A)、p CDH-CMV-IKKβ(S177E,S181E))以及空载体(p CDH-CMV-VECTOR),puro药筛构建NFκB信号通路持续激活以及NFκB信号通路持续抑制细胞系。Western Blot检测细胞内NFκB信号通路负相关蛋白IKBα表达水平。免疫荧光检测药物处理细胞后细胞内NFκB信号通路关键蛋白P65入核情况。实时荧光定量PCR检测他莫昔芬耐药细胞MCF7R/LCC9细胞内NFκB m RNA水平以及NFκB相关凋亡蛋白、抗凋亡蛋白的转录水平。细胞划痕实验以及Transwell迁移实验检测药物对细胞迁移能力的影响。Transwell侵袭实验检测药物对细胞侵袭能力的影响。组间统计学差异检验应用SPSS19.0软件统计分析,检验标准为P<0.05具有统计学意义。研究结果:1.ACT001联合他莫昔芬可以明显增加他莫昔芬对MCF7、T47D、ZR7530细胞系的增殖抑制以及克隆形成能力的抑制作用。2.ACT001可以增加他莫昔芬对MCF7、T47D、ZR7530细胞的凋亡诱导作用。3.他莫昔芬作用48h后可以激活细胞内NFκB信号通路。免疫荧光检测他莫昔芬作用48h后的乳腺癌细胞内NFκB信号通路核心蛋白P65入核增多。Western Blot检测他莫昔芬作用下细胞内NFκB信号通路负调节蛋白IKBα表达量下降。实时荧光定量PCR检测他莫昔芬作用下细胞内NFκB转录水平升高。4.慢病毒包被转导成功构建NFκB信号通路不同状态的稳定细胞系。他莫昔芬对NFκB信号通路不同状态的细胞增殖抑制作用不同。NFκB信号通路持续激活细胞对他莫昔芬反应不敏感,而NFκB信号通路持续抑制细胞对他莫昔芬反应敏感性提高。5.ACT001可以恢复MCF7R/LCC9细胞对他莫昔芬的敏感性。MCF7R/LCC9细胞内NFκB及其相关凋亡蛋白转录水平均有升高。抗凋亡蛋白TRAF1 m RNA水平升高最明显。6.低浓度他莫昔芬促进细胞的迁移侵袭。ACT001联合他莫昔芬可以有效抑制细胞迁移侵袭。研究结论:1.NFκB信号通路的激活参与激素受体阳性乳腺癌细胞他莫昔芬耐药性的发生,ACT001通过抑制NFκB信号通路增加他莫昔芬对激素受体阳性乳腺癌细胞的增殖抑制以及凋亡诱导,从而逆转他莫昔芬耐药乳腺癌细胞对他莫昔芬的敏感性。2.低浓度他莫昔芬可促进乳腺癌细胞迁移,ACT001可抑制他莫昔芬的促迁移作用,降低细胞迁移率。