大白菜 (Brassica campestris ssp.pekinensis Lour.)是原产我国的重要蔬菜，种质资源十分丰富，其品种改良历来受到蔬菜育种工作者的重视。大白菜杂交亲本系的选育目前主要采用常规方法，虽然成效显著，但也还存在一些不足，比如，育种时间长，育成一个稳定优良自交系一般需要5-7年，甚至更长时间，从它们中选育自交系尤其费事、费工。 小孢子培养技术已成为当前国内外植物生物技术领域中最活跃的研究课题之一。采用该技术获得双单倍体，从中选育可以用做杂交种的亲本，纯化速度快，纯合度高。本实验对7个基因型的大白菜进行小孢子培养研究，主要结果如下： 1．基因型的筛选：对7个不同来源不同类型的大白菜基因型，进行小孢子培养，筛选出四个较易出胚的基因型，它们是：HY，KF，BL和SZ；产胚量最高的基因型HY是产胚量最低的基因型SZ的12.32倍，而ZX、QX和QP三个品种没有诱导出胚。 2．在培养基中添加0.1mg／ml活性炭对大多数品种的大白菜小孢子培养的胚胎发生具有较为明显的作用，能增加胚状体产量。其中活性炭对BL效果最明显，产胚量平均为14.58个／蕾，对照为0.67个蕾，处理是对照的21.76倍；KF效果其次，产胚量平均17.08个／蕾，对照为1.25个/蕾，处理是对照的13.67倍；对HY其产胚量平均3.42个／蕾，对照为3.17个／蕾，处理仅是对照的1.08倍，效果不明显。 3．蔗糖浓度的改变也能影响小孢子胚胎发生，不同基因型所需蔗糖浓度不同。KF适宜先在NLN-16中诱导48h，再转到NLN-13中继续培养，有较高的胚产量。 4．在小孢子培养时先用加有秋水仙素的NLN-13进行诱导，48h后换为NLN-13继续培养，仅HY得到3个胚状体，而且没有得到再生株，无法统计加倍效果。 5．适当提高培养基中琼脂的浓度，可降低胚状体发育过程中玻璃质化苗数，本实验表明MS+1.2％琼脂是比较理想的浓度。 6．利用流式细胞仪对再生的大白菜植株进行了倍性鉴定，发现在组培中胚状苗的自然加倍率为56.4％；单倍体率为43.6％。 7．三种染色体加倍方法中，秋水仙素浸泡田间单倍体苗根部的加倍率为40％，秋水仙素涂抹生长点的加倍率为35％，秋水仙素直接处理离体小孢子，仅得到3个胚状体，而且全死亡，无法得知加倍效果。再生幼苗的移栽成活率达90.9％。8.从80条随机引物中筛选出多态性较强的三条引物551，5344和5134。分析 19棵小抱子植株之间的差异时，一条引物5344的RAPD结果就能鉴别出差异 的存在，其JaCCard相似性系数为0.16一1.00，平均为0.58。表明小袍子之 间是存在差异的，各植株的基因型是不同的。与对照相比，说明这些植株是 来自不同的胚状体而不是来自花药或其它组织的体细胞。另外，对同一小袍 子植株的8个株系，采用三条引物551，5344和5134进行RAPD分析，结果 显示没有明显特异带产生，说明来自同一胚状体的各个单株之间没有明显差 异，同时表明上述不同小抱子之间的差异也不是组织培养过程中产生的，排 除了组培变异的干扰。