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一、背景与目的毛囊生长是一个复杂的周期性过程,包括毛发生长期、退行期、休止期。虽然调控毛发周期的机制还未完全阐明,目前已明确:毛乳头与邻近毛囊上皮、毛母质、外毛根鞘之间的相互作用调控着每个周期的延续和过渡。间质来源的毛乳头位于毛囊的底部,外周由毛母质包绕,它在体内和体外具有诱导毛囊生长的特性。来源于毛乳头细胞的信号可以直接影响邻近毛母质细胞和外毛根鞘细胞的生长,并且可以调控毛囊生长周期。这些信号包括sonic hedgehog(Shh)途径、胰岛素样生长因子(IGF-1)、wnt/β-catenin途径、骨形成蛋白(BMP)、成纤维细胞因子(FGF)、转化生长因子-β(TGF-β)和肝细胞生长因子(HGF)等。雄激素性脱发(AGA)是最常见的男性脱发疾病,发病机制涉及局部雄激素分泌增多、雄激素受体(AR)表达量增多、II型5α还原酶和旁分泌等,而双氢睾酮(DHT)目前被认为是雄激素性脱发主要致病因素。睾酮在II型5α还原酶的作用下可形成活性更强的DHT,II型5α还原酶的致病作用已经非常明确,男性雄激素性脱发的首选治疗方案是长期口服II型5α还原酶抑制剂,它可降低患者血清和头皮的DHT浓度,目前DHT诱导的雄激素性脱发的发病机制尚未完全明确。既往研究发现DHT促进AGA患者顶部毛乳头细胞分泌TGF-β,从而抑制毛囊上皮细胞的生长,DHT同时也可以促进胡须部毛乳头细胞分泌IGF-1,从而促进毛囊上皮细胞的生长。本实验将进一步研究DHT诱导的旁分泌途径,初步探索FGF2及FGF7是否参与男性雄激素性脱发的发病。二、方法和结果1、从人头皮中分离出毛乳头,体外培养毛乳头细胞,检测各代毛乳头细胞中AR的表达。结果:体外传代培养时,第6代毛乳头细胞AR蛋白表达量明显低于第3代毛乳头细胞。2、构建AR腺病毒载体并转染毛乳头细胞,RT-PCR、Western blot、免疫荧光检测AR的表达,CCK-8法检测AR腺病毒对人毛乳头细胞增殖的影响。结果:对照组(未转染腺病毒的毛乳头细胞)、空载体组、AR过表达组各组之间毛乳头细胞的增殖无统计学差异。3、以下步骤均在过表达AR的毛乳头细胞中进行,根据实验是否加入DHT、0.01%乙醇进行分组,脱发区顶部毛乳头细胞组包括:0M(0mol/L)-DHT组、0.01%乙醇组、10n M(10nmol/L)-DHT组;枕部毛乳头细胞组包括:0M-DHT组、0.01%乙醇组、10n M-DHT组。RT-PCR、Western blot、ELISA检测FGF7及FGF2的表达。结果:顶部毛乳头细胞中,0.01%乙醇组FGF7m RNA表达水平高于10n M-DHT组[(1.58±0.15)vs(0.83±0.18)P=0.018],0M-DHT组FGF2m RNA表达量高于10n MDHT组[(0.90±0.19)vs(0.41±0.11)P=0.22]。枕部毛乳头细胞中,FGF7及FGF2m RNA表达量差异无统计学意义。细胞内FGF7及FGF2的蛋白检测:脱发区毛乳头细胞中,0M-DHT组FGF7蛋白表达水平高于10n M-DHT组[(0.393±0.060)vs(0.282±0.019)P=0.038],10n M-DHT组FGF2蛋白表达水平高于0.01%乙醇组[(0.294±0.019)vs(0.201±0.058)P=0.021]。枕部毛乳头细胞中,10n M-DHT组FGF7蛋白表达水平高于0M-DHT组[(0.207±0.025)vs(0.108±0.038)P=0.038],FGF2蛋白表达差异无统计学意义。分泌型FGF7及FGF2蛋白检测:顶部毛乳头细胞中,与0n M-DHT组相比,当使用含10n M-DHT的完全培养基培养顶部毛乳头细胞时,FGF7外分泌量从216.446pg/m L上升至249.942pg/m L,FGF2外分泌量从123.125pg/m L下降至51.667 pg/m L,而与0.01%乙醇组相比,当加入10n M-DHT时,FGF2外分泌量从12.381pg/m L上升至51.667 pg/m L。三、结论1、体外传代培养毛乳头细胞时,AR蛋白表达量不稳定。2、AR重组腺病毒对毛乳头细胞的增殖无显著性影响。3、DHT可抑制细胞内FGF7蛋白的表达,促进分泌型FGF7及FGF2蛋白的表达。本研究初步证明FGF7及FGF2有可能参与了AGA发病,为进一步深入研究提供了依据。