论文部分内容阅读
骨肉瘤是一种临床常见的骨的原发性恶性肿瘤,居骨恶性肿瘤的第一位,恶性程度高,易于侵袭和转移,预后极差。骨肉瘤的发生发展是一个涉及多阶段的复杂的过程,其具体机制尚不十分清楚。侵袭和转移作为骨肉瘤的两个重要的生物学特性,其过程受肿瘤细胞之间的粘附作用,肿瘤细胞对细胞外基质的降解能力,肿瘤细胞的迁移等很多因素的影响。已有许多研究表明MMP-2和Rb两种基因与肿瘤的恶性侵袭和转移有关,但有关骨肉瘤的研究较少,而且尚无联合检测MMP-2和Rb两种基因在骨肉瘤中的表达及其相关性的研究报道。本研究采用免疫组化链霉素抗生物素蛋白-过氧化酶法(Streptavidin Peroxidase,S-P法)在蛋白水平联合检测骨肉瘤中MMP-2和Rb两种基因的表达情况,分析其表达与骨肉瘤生物学行为之间的关系,探讨利用MMP-2和Rb两种基因作为分子标记物评估肿瘤侵袭和转移潜能的可能性。目的:比较MMP-2和Rb两种基因在可切除的人骨肉瘤组织中的表达情况,探讨其在人骨肉瘤的发生、发展中的意义。方法:采用免疫组织化学方法对67例可切除的骨肉瘤组织及10例骨软骨瘤进行了MMP-2和Rb蛋白的表达的测定。本研究选用承德医学院附属医院2000年1月～2008年5月手术切除的骨肉瘤标本67例,男性36人,女性31人。平均年龄20.1岁(5～63岁)。部位:股骨34例,胫腓骨24例,其他部位9例。Enneking外科分期:Ⅰ期16例,Ⅱ期38例,Ⅲ期13例。组织学分型:骨母细胞型30例,软骨母细胞型16例,纤维母细胞型13例,其他类型(血管扩张型、混合型)8例。每个蜡块进行连续切三张,厚5μm。其中一张切片进行HE染色,常规病理观察,另两张切片应用免疫组化法(S-P法)进行MMP-2和Rb蛋白的表达的测定。分析MMP-2和Rb在骨肉瘤中的表达与患者性别、肿瘤部位、组织学类型、Enneking外科分期、转移等的关系。免疫组化采用S-P法,MMP-2和Rb仅做定性分析。MMP-2、Rb阳性判断标准:根据阳性细胞百分率及显色深浅采用半定量积分法分级,每张切片随机选取10个高倍视野,计数染色阳性细胞,取平均值,计算阳性细胞百分率。评分标准如下:(1)显色深浅:按着色程度分为:基本未着色0分,着浅色为1分,中度着色为2分,强阳性着色为3分。(2)按阳性细胞百分率分为:染色细胞数≤5%为0分,6%～25%为1分,26%～75%为2分,＞75%为3分。以上两项相加最终评定结果,0～1分为阴性(-),2～3分为弱阳性(+),4～5分为中度阳性(++),＞5分为强阳性(+++)。用正常人的血清分别作为第一抗体做阴性对照。实验资料应用SPSS11.5for windows统计软件包,对结果根据不同情况用X~2检验、Kruskal-Wallis秩和检验、Spearman等级相关分析处理。结果:1 MMP-2的表达MMP-2表达阳性的肿瘤细胞呈棕黄色颗粒,主要定位于肿瘤细胞的细胞浆。表达阳性的肿瘤细胞常聚集成团而成灶性分布,或分布于肿瘤灶的边缘。MMP-2骨肉瘤中阳性表达率为79.1%(53/67),在骨软骨瘤对照组织中阳性率为0%(0/10),两者表达之间的差异有统计学意义(P＜0.01),MMP-2表达率与骨肉瘤患者性别、病变部位及肿瘤病理类型等无统计学意义,与骨肉瘤外科分期,远处转移有统计学意义。2 Rb的表达Rb表达阳性的肿瘤细胞呈棕黄色或棕褐色,主要定位于肿瘤细胞的细胞核。Rb骨肉瘤阳性表达率为50.7%(34/67),在骨软骨瘤对照组织中Rb蛋白表达阳性率为90.0%(9/10),两者表达之间的差异有统计学意义(P＜0.05),Rb表达率与骨肉瘤患者性别、病变部位及肿瘤病理类型等无统计学意义,与骨肉瘤外科分期,远处转移有统计学意义。3 MMP-2和Rb表达的关系将MMP-2和Rb的表达进行Spearman等级相关分析,结果显示:在骨肉瘤中MMP-2的表达与Rb的表达无关。结论:1在骨肉瘤中MMP-2高表达、Rb低表达,它们可能参与了骨肉瘤的发生、发展过程。2骨肉瘤中MMP-2与Rb的表达没有相关性。3应用免疫组化S-P法联合检测MMP-2和Rb的表达情况可作为标记物评估骨肉瘤的侵袭和转移潜能。