中兽药双黄连注射液是由金银花、黄芩和连翘三味中药材,通过一定的工艺得到的最终灭菌小容量注射液,主要含有绿原酸、黄芩苷和连翘苷等有效成份。兽医临床使用非常广泛,用于预防和治疗畜禽外感风寒所致的上呼吸道感染、急性支气管炎、急性扁桃腺炎和轻型肺炎等。已有研究表明,其发挥上述功用的主要活性成份是：黄芩苷、绿原酸和连翘苷。然而,中兽药双黄连注射液质量标准仅采用高效液相色谱法对其中一种主要活性成份—黄芩苷的含量进行测定,作为产品的质量控制方法。与此同时,一些不良兽药生产企业,为提高所谓“疗效”,进而提高其产品市场占有率,往双黄连注射液中非法添加解热镇痛类药物,以至中兽药双黄连注射液不良反应事件频发。然而迄今为止,对中兽药双黄连注射液中三种有效成份同时检测的方法以及非法添加解热镇痛类药物的筛查与确证方法均鲜见报道。本研究旨在完善双黄连注射液的质量控制,有力打击双黄连注射液中非法添加解热镇痛类药物的情况,切实保障广大养殖户的合法权益及广大人民群众的食品安全,开展了绿原酸、黄芩苷和连翘苷三种有效成份同时检测方法和非法添加解热镇痛类药物的筛查与确认方法研究。1.建立了高效液相色谱法同时测定双黄连注射液中绿原酸、黄芩苷和连翘苷三种主要活性成份的方法。结果表明：绿原酸、黄芩苷和连翘苷在1～200μg/mL浓度范围内线性关系良好(r>0.999)；平均加标回收率均大于96%,并对16批次双黄连注射液产品进行实际检测,满足双黄连注射液的符合性检测要求。该方法操作简便、准确、可靠,可用于双黄连注射液的质量控制,也为中兽药双黄连注射液标准限度的确定提供了参考数据。2.建立了高效液相色谱法测定兽用双黄连注射液中非法添加安乃近、对乙酰氨基酚、氨基比林和安替比林等4种解热镇痛类药物的方法。四种解热镇痛类药物用磷酸盐缓冲液(pH值7.0)-甲醇(65：35,V:V)提取与稀释后,经高效液相色谱—二极管阵列检测器检测,保留时间定性,外标法定量。结果显示,四种解热镇痛类药物的浓度在1～100μg/mL范围内的线性良好,相关系数r均为0.9999,回收率在97.8%～100.8%范围内,RSD在0.9%～4.0%之间,检测限1.0 mg/mL。本方法快速、准确,可用于兽用双黄连注射液中非法添加解热镇痛类药物的定性和定量检测。