烟草野火病和烟草角斑病是烟草生产过程中两种主要的细菌性病害，侵染烟草后会造成烟草叶片穿孔，变褐，烤后叶片易碎，工业使用性降低，对于烟农的增产增收造成严重的影响。因此，建立一套烟草野火病和角斑病的精准可视化检测体系，能够在烟草叶片中未显症之前进行检测和预警，可为病害的防治提供依据，具有重要的理论和现实意义。　　环介导等温扩增技术（Loop-mediated Isothermal Amplification，简称LAMP），具有检测速度快、对检测环境要求低、特异性高、灵敏性强等优点，目前被广泛应用于医学，动植物病害检测，转基因食品检测等领域。本试验将LAMP技术用于烟草野火病和烟草角斑病的检测，利用全基因组比对的手段，分别获得了1组烟草野火病菌和角斑病菌的LAMP特异性检测引物，在此基础上，建立和优化了两种病原的LAMP快速检测方法，并进行了田间应用，为病害发生预报提供了一种新的技术和手段。主要研究结果如下：　　（1）分离与纯化了烟草野火病菌和烟草角斑病菌。分别对来自于不同地区的烟草病叶标本进行了病菌的分离、纯化和鉴定，最终获得纯化的烟草野火病菌与烟草角斑病菌。　　（2）对烟草野火病菌进行普通PCR引物设计，最终得到烟草野火病的特异性引物40429，并验证其特异性。试验利用mavue2.3.1软件进行全基因组的比对，根据筛选出来的特异性区段，利用Primer Premier 6.0软件设计引物。将设计的引物与对照菌株进行普通PCR扩增对照，最终获得了一组特异性引物。　　（3）试验分别获得了一组烟草野火病菌和一组烟草角斑病菌的LAMP引物。根据普通PCR特异性引物对应的特异性区段，利用LAMP在线设计网站LAMP primer designing software PrimerExplorer V5，设计了烟草野火病菌LAMP检测引物并进行了验证；由于缺少烟草角斑病菌的全基因组数据，试验通过利用烟草野火病菌的普通 PCR引物对于烟草角斑病菌进行扩增，同时对于扩增产物测序，并与烟草野火病菌的扩增产物测序结果相比对，最终获得了烟草野火病与烟草角斑病存在的差异片段。基于此，设计了烟草角斑病菌的特异性引物378/379/380/381，并验证了引物的特异性。　　（4）建立并优化了烟草野火病与烟草角斑病LMAP快速检测体系。基于LAMP检测体系中参与反应的反应物，对BST DNA Polymerase的使用量，dNTP的使用量，Mg2+的使用浓度，甜菜碱的使用浓度，内外引物的配比，反应时长，反应温度等反应条件进行优化，最终确定了最优化的田间LAMP检测工作浓度。　　（5）将建立的烟草野火病与烟草角斑病LAMP检测体系与田间应用相结合，验证了检测体系的可靠性。利用田间采样的疑似染病叶片及健康叶片作为对照，通过和普通PCR、荧光定量PCR做对比，试验最终确定了LAMP检测体系的可靠性以及灵敏性。