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目的卵巢储备功能减退（diminished ovarian reserve,DOR）是指女性生育力下降,定义为卵巢卵母细胞数目减少,伴有卵巢储备指标的改变,卵巢储备下降是导致女性不孕的常见原因,也是临床治疗棘手的疾病之一。既往有研究发现DOR女性发生复发性流产、孕产期并发症的风险增加;不良妊娠结局与黄体功能不足（luteal phase deficiency,LPD）相关,但目前临床证据尚不充分。LPD与多种因素相关,如卵泡发育不良,雌激素分泌减少;黄体生成素（luteinizing Hormone,LH）脉冲峰值不高,孕激素分泌不足等,其中颗粒细胞功能缺陷导致排卵后颗粒细胞黄素化不良是引发LPD的重要原因。课题组前期研究发现自噬缺陷会造成颗粒细胞分化障碍,影响卵泡发育,但自噬缺陷在DOR女性LPD发生中的作用目前仍不清楚。基于上述背景,本研究一方面借助DOR女性接受辅助生殖技术（assisted reproductive technology,ART）助孕过程的临床数据以及孕产期并发症的随访信息,明确DOR患者是否存在LPD,以及DOR患者孕产期母婴并发症的相关风险;另一方面,探讨颗粒细胞自噬缺陷在DOR女性LPD发生中的作用及其机制,为DOR患者LPD的发生机制提供理论依据,为临床LPD的干预治疗提供新思路。方法（1）DOR女性黄体功能不足的临床研究:纳入2014年1月至2014年12月于山东大学附属生殖医院行第1周期体外受精/卵胞质内单精子注射-胚胎移植（in vitro fertilization/intracytoplasmic sperm injection-embryo transfer,IVF/ICSI-ET）的 40 岁以下女性患者,按照卵巢储备指标分为DOR组和对照组,收集两组患者IVF/ICSI-ET前黄体中期的孕激素水平。入组条件:DOR组:基础血清卵泡刺激素（follicle stimulating hormone,FSH）≥10IU/L,抗苗勒氏管激素（anti-Müllerian hormone,AMH）＜1.2 ng/ml;对照组:FSH＜10 IU/L,AMH≥1.2 ng/ml。根据排卵时间,检测两组患者黄体中期（排卵后6-8天）的孕激素水平。按照年龄和体重指数（body mass index,BMI）进行倾向性评分匹配。比较DOR组与对照组黄体中期血清孕激素水平,评估两组黄体功能的差异。（2）DOR患者孕产期母婴并发症的临床研究:纳入2012年1月至2019年6月在山东大学附属生殖医院行IVF/ICSI-ET后新鲜胚胎移植获单胎活产的40岁以下患者,按照卵巢储备指标分为DOR组和对照组。纳入标准同第一部分。按照年龄和BMI将对照组与DOR组进行倾向性评分匹配,比较两组女性常见母婴并发症的发生风险,包括妊娠期高血压疾病（hypertensive disorders of pregnancy,HDP）、妊娠期糖尿病（gestational diabetes mellitus,GDM）、前置胎盘、早产（preterm birth,PTB）和低出生体重（low birthweight,LBW）。（3）自噬缺陷对颗粒细胞黄素化的影响及机制研究:分别通过体内、体外功能实验探讨自噬缺陷对颗粒细胞黄素化的影响及相关机制。利用人颗粒细胞系SVOG和KGN,分别通过siRNA干扰自噬关键基因ATG5及BECN1的表达,造成自噬缺陷,或利用自噬抑制剂氯喹抑制自噬过程,然后检测细胞培养液中孕激素水平、细胞中孕激素合成关键基因StAR和CYP11A1的mRNA和蛋白表达水平以及LHR的蛋白表达水平;进一步利用hCG激活颗粒细胞中的LH信号通路,通过Western blot检测ERK1/2及CEBPβ磷酸化水平,明确自噬缺陷对颗粒细胞LH信号通路的影响;同时检测妊娠期高血压相关因子Relaxin2的mRNA和蛋白表达水平。在体内实验中,通过小鼠腹腔注射自噬抑制剂氯喹诱导小鼠自噬缺陷,检测小鼠血清孕激素水平,观察小鼠卵巢组织形态学变化,并检测孕激素合成关键蛋白StAR和CYP11A1的表达。结果（1）DOR女性黄体功能异常的临床研究:通过比较160例DOR患者和285例对照组女性孕激素水平,发现DOR患者黄体中期血清孕激素水平显著低于对照组（11.18±5.40 ng/ml vs.13.09±5.99 ng/ml,P=0.002）,提示 DOR 患者发生 LPD 风险可能增高。（2）DOR患者孕产期母婴并发症的临床研究:通过随访193例DOR患者和386例对照组女性的孕产期母婴并发症,发现DOR患者妊娠期高血压疾病的发生风险显著增加（5.7%vs.2.1%,P=0.021）。妊娠期糖尿病（5.7%vs.5.2%,P=0.794）、前置胎盘（1.6%vs.1.8%,P=1.000）、早产（10.9%vs.7.5%,P= 0.174）、低出生体重儿（6.2%vs.5.4%,P=0.704）等并发症的发生率两组无明显差异。（3）自噬缺陷对颗粒细胞黄素化的影响及机制研究:在SVOG和KGN细胞系中抑制颗粒细胞自噬水平后,颗粒细胞孕激素合成减少,StAR、CYP11A1以及Relaxin2的mRNA和蛋白表达降低,LHR的蛋白表达降低,hCG引起的p-ERK和p-CEBPβ表达均明显降低,提示自噬缺陷导致颗粒细胞中LH信号通路激活障碍。抑制小鼠体内自噬水平后,血清孕激素水平显著降低,黄体形成异常,小鼠卵巢内孕激素合成关键基因StAR和CYP11A1的蛋白表达显著降低。结论（1）与卵巢储备正常女性相比,DOR患者黄体中期孕激素水平显著降低,提示DOR患者存在LPD风险增高。（2）与卵巢储备正常女性相比,DOR患者妊娠高血压疾病发生风险增高,建议临床中关注DOR患者妊娠期的血压变化,加强孕产期监护。（3）颗粒细胞自噬缺陷导致LHR表达降低、LH通路激活受损、孕激素合成关键蛋白表达减少,最终导致孕激素合成不足。此外,自噬缺陷也引起颗粒细胞Relaxin2表达降低,可能与妊娠期高血压疾病发生有关,为临床DOR患者LPD的干预治疗提供了新靶点。