【摘 要】
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目的:1、筛选SSc患者和正常人血清外泌体中显著差异表达的miRNA,为疾病早期诊断标志的筛选及后继研究提供科学依据。2、观察补肾益精中药复方对硬皮病小鼠皮肤纤维化的作用并探讨其作用机制。方法:1、收集硬皮病患者及正常人血清,通过沉淀法提取外泌体,分离回收Sma11 RNA,过滤得到miRNA,建立数据库,利用DEGseq和DESeq2软件筛选差异miRNA。2、构建SSc小鼠模型,分别采用黄芪甲
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目的:1、筛选SSc患者和正常人血清外泌体中显著差异表达的miRNA,为疾病早期诊断标志的筛选及后继研究提供科学依据。2、观察补肾益精中药复方对硬皮病小鼠皮肤纤维化的作用并探讨其作用机制。方法:1、收集硬皮病患者及正常人血清,通过沉淀法提取外泌体,分离回收Sma11 RNA,过滤得到miRNA,建立数据库,利用DEGseq和DESeq2软件筛选差异miRNA。2、构建SSc小鼠模型,分别采用黄芪甲苷、补肾益精中药复方含药血清、补肾益精中药复方含药血清+miR-26a antagomir干预后,采集小鼠皮肤组织进行组织病理检查,观察硬皮病小鼠真皮厚度以及胶原纤维情况;QPCR以及WB检测miR-26a、FLI1、Collagen Ⅰ 和 Fibronectin mRNA 和蛋白的表达。结果:1、与正常人相比,SSc患者血清外泌体中异表达的miRNA共有1337个,其中366个miRNA表达上调,971个miRNA表达下降。其中miR-126-3p和miR-126-5p表达均明显上调。2、与正常组相比,HE染色、Masson染色均显示硬皮病小鼠真皮厚度明显增加,胶原纤维数量增多。QPCR结果显示,与正常组相比,模型组miR-26a、Fibronectin、Collagen Ⅰ mRNA表达显著上调（P<0.05）,FLI1 mRNA表达显著下调（P<0.05）;与模型组相比,黄芪甲苷组和补肾益精方组miR-26a mRNA表达均可下调,但无显著性差异（p>0.05）,FLI1 mRNA 表达均显著上调（p<0.05）,Fibronectin、Collagen Ⅰ mRNA 表达均显著下调（p<0.05）,补肾益精方+miR-26aantagomir 组 miR-26a、Fibronectin、CollagenⅠ mRNA表达显著下调（p<0.05）,FLI1 mRNA表达均显著上调（p<0.05）;与补肾益精方组相比,补肾益精方+miR-26a antagomir组miR-26a、Fibronectin mRNA表达下调,但无显著性差异（p>0.05）。WB检测结果表明,与正常组相比,模型组FLI1蛋白表达显著下调（P<0.05）,Fibronectin、Collagen Ⅰ蛋白表达均显著上调（P<0.05）;与模型组相比,黄芪甲苷组FLI1蛋白表达显著上调（p<0.05）,补肾益精方组或补肾益精方+miR-26a antagomir组FLI1蛋白表达无显著差异（p>0.05）;与补肾益精方组相比,补肾益精方+miR-26a antagomir组FLI1 mRNA表达无显著性差异（p>0.05）。与模型组相比,黄芪甲苷组、补肾益精方组和补肾益精方+miR-26a antagomir组Fibronectin、Collagen Ⅰ蛋白表达均显著下调（p<0.05）;与补肾益精方组相比,补肾益精方+miR-26a antagomir 组 Fibronectin、Collagen Ⅰ 蛋白表达均显著下调（p<0.05）。结论:1、SSc患者血清外泌体中存在较多差异表达的miRNA,其中miR-126表达上调明显,可能与SSc血管病变相关。2、黄芪甲苷、补肾益精中药复方均可减轻SSc小鼠皮肤纤维化,其机制可能与下调miR-26a进而促进FLI1表达有关。
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