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目的:通过胱膀灌注青藤碱(Sinomenine,SIN)作用于N-甲基亚硝基脲(N-methyl-nitrosourea,MNU)诱发的雄性SD大鼠膀胱癌模型,研究SIN对MNU致癌大鼠膀胱癌的肿瘤免疫及细胞凋亡的影响,初步探讨SIN在膀胱癌转归中的抗肿瘤作用。材料与方法:本研究以雄性SD大鼠为实验对象,采用随机对照原则将雄性SD大鼠平均分为5组,每组15只。各组分别为对照组(A组)、模型组(B组)、青藤碱组(C组)、青藤碱+半量BCG组(D组)、BCG组(E组)等5组,除了A组,其余各组均以MNU溶液对雄性SD大鼠进行膀胱灌注,建立大鼠膀胱癌模型。各组建模持续10周后,均进行膀胱灌注进行干预,其中A、B两组灌注液为0.2ml生理盐水,C组灌注液为0.2ml青藤碱溶液;D组在C组基础上,同时加用浓度1.25mg/ml的BCG0.2ml膀胱灌注;E组给予浓度2.5mg/mlBCG0.2ml膀胱灌注。以上操作均每周1次,持续4周。抽尾静脉血后立即处死大鼠,取膀胱组织采用免疫印迹法检测各组细胞毒T淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4)、程序性细胞死亡因子1(programmed cell death-1 receptor,PD-1)和caspace-3,ELISA法检测血清可溶性共刺激分子B7-H3(co-stimulatory molecule B7-H3,B7-H3)的水平,HE染色法评估大鼠膀胱病理结果。结果:1、各组CTLA-4的表达量依次为12.30±2.65、33.54±4.92、26.04±4.57、23.85±4.71和17.97±4.48;其中A组CTLA-4的表达量最低,B组最高;A组CTLA-4的表达量较其余4组均显著降低(P<0.05);B组CTLA-4的表达量较其余4组均显著增高(P<0.05);E组CTLA-4的表达量明显高于C组(P<0.05)。各组PD-1的表达量依次为15.53±4.72、36.54±6.45、28.30±5.18、21.59±7.04和19.51±5.74;其中A组PD-1的表达量最低,B组最高;A组PD-1的表达量较其余4组均显著降低(P<0.05);B组PD-1的表达量较其余4组均显著增高(P<0.05);C组PD-1的表达量显著低于D、E两组(P<0.05)。各组B7-H3的表达量依次为12.30±2.65、33.54±4.92、26.04±4.57、23.85±4.71和17.97±4.48;其中A组B7-H3的表达量最低,B组最高;A组B7-H3的表达量较其余4组均显著降低(P<0.05);B、C两组B7-H3的表达量均较D、E组显著增高(P<0.05)。2、各组caspase-3的表达量依次为0.84±0.26、1.83±0.51、1.28±0.35、1.21±0.32和1.08±0.37;其中A组caspase-3的表达量最低,B组最高;A组caspase-3的表达量较其余4组显著降低(P<0.05);B组caspase-3的表达量较其余4组显著增高(P<0.05);C组caspase-3的表达量分别较D、E组明显增高(P<0.05)。3、A组病检结果为正常膀胱组织,B、C、D、E组均被诊断为膀胱癌。各组病理检查评分均值依次分别为0.79±0.31、3.18±1.33、2.31±0.84、1.39±0.65和1.16±0.52;5组中,A组膀胱炎症及病检HE评分最低,B组最高;A组膀胱炎症及病检HE评分较其余4组均显著降低(P<0.05);B组膀胱炎症及病检HE评分较其余4组均显著增高(P<0.05);C组的膀胱炎症及病检HE评分分别较D、E两组显著增高(P<0.05)。结论:1.SIN能通过下调膀胱癌的免疫检查点分子表达水平而对膀胱癌起到抑制作用;2.SIN能显著抑制MNU致大鼠膀胱癌caspase-3的表达,加速膀胱癌细胞的凋亡进程;3、SIN还能显著降低MNU致大鼠膀胱癌病理评分,对改善膀胱癌的预后起到一定积极的作用。