食源性致病菌是引起各类食物安全事件的重要诱因之一,世界各国由于食源性致病菌污染饮食,而爆发的食品安全事件时有发生,特别是近些年来由单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes)引起的食物中毒事件急剧增长,已在日常生活中随处可见,特别是在肉制品和奶制品中,因单增李斯特菌污染食物而致人患病的事件已严重影响人类的正常生活。该菌之所以在现代生活中能广泛存在我们的饮食中,一方面由于该菌耐低温,且在低温条件下生长良好；另一方面因为现代人越来越多饮食速食食品和冷藏食品,这些习惯为单增李斯特菌的生长和传播提供良好的条件,因此,目前急需建立一种快捷、高效、操作简便的检测辨别技术确定单增李斯特菌,为我们的饮食安全树立一道安全屏障。RAPD检测技术起源于20世纪90年代,其方法由于利用随机引物对样品DNA进行扩增,事先不需要知道被测样品的基因序列,且扩增的多态性条带可用于样品间亲缘关系的分析,故被研究学者广泛应用于各个领域,从而形成一项比较成熟的技术。本论文旨在通过对自主设计的10条随机引物进行RAPD-PCR扩增,依据扩增图谱带型多样性、清晰度和重复性等方面的分析,筛选出对李斯特菌属属内菌株有特异性的引物,以及对单增李斯特菌分离株有特异性的引物,从分子分型方向对单增李斯特菌分离株进行同源性分析,鉴别出各分离株与单增李斯特菌标准株CMCC54004间的亲缘相互关系,并依据特异性引物扩增获得特异性条带以区别除单增李斯特菌之外的属外其它菌株,以期建立快速检测农副产品中单增李斯特菌的目的。通过试验,获得一下结论：(1)采用四种DNA提取方法提取单增李斯特菌样品DNA,通过对DNA提取方法的优化,筛选出可获得高质量、高重复性模板DNA的提取方法——基因组DNA试剂盒提取法；(2)通过对RAPD-PCR反应体系中DNA浓度、聚合酶浓度、引物浓度、dNTP Mixture浓度和Mg2+浓度5个实验因子进行单因素实验和正交实验分析,确定最优的反应体系为：总体积为20μL,其中各成分浓度为200μM dNTP Mixture、20pmol引物浓度、5 mM Mg2+浓度、2 U Taq DNA聚合酶浓度、50 ng模板DNA浓度；(3)依据筛选出的最优反应程序,对10条随机引物特异性筛选,确定通过引物AM 09 (5’-TGGTGACCGT-3’)可特异性区分单增李斯特菌各分离株,利用组合引物AM 07+AM 09可特异性区分李斯特菌属内6种标准株,且利用引物AM 09扩增单增李斯特菌CMCC 54004获得473 bp特异性带型,可区分除单增李斯特菌之外的菌株,因此这条特异性带型结合引物AM 09可用于食物中单增李斯特菌污染情况的调查研究,对单增李斯特菌分离株的分型研究也很有用处；(4)依据能否扩增473 bp特异性条带,通过人工模拟污染实验以及对纯菌液RAPD检测技术检出限的确定,结果表明牛奶和牛肉增菌3 h后可检测出特异性带型,检出限分别为1.79×105 cfu/mL和2.48×105 cfu/mL,黄瓜中的检出限为1.98 X 105cfu/mL,需增菌6 h。因此从模拟实验中证实本试验设计的方案可用于实际应用中的样品检测。