清心滋肾汤对绝经期潮热大鼠体温和血清NO、ET的影响及其HPLC指纹图谱研究

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目的:通过手术摘除雌性大鼠双侧卵巢建立绝经期大鼠模型,观察清心滋肾汤对绝经期潮热大鼠尾部皮肤温度的影响,以及对绝经期潮热大鼠血清ET、NO的影响。建立清心滋肾汤水煎液的HPLC指纹图谱,并测定多种成分的含量,为清心滋肾汤的质量控制提供依据。方法:1.将70只成年SD大鼠随机分为去卵巢组60只,假手术组10只。去卵巢组大鼠行双侧卵巢摘除手术,将双侧卵巢摘除并存活的大鼠按体重随机分为5组(n=10):模型组,西药组(戊酸雌二醇0.08mg/kg),清心滋肾汤低剂量组(生药8g/kg),清心滋肾汤中剂量组(生药16g/kg)、清心滋肾汤高剂量组(生药32g/kg);另有假手术组给予生理盐水。每周连续测量各组大鼠尾部皮肤温度。2.将70只成年SD大鼠随机分为去卵巢组60只,假手术组10只。去卵巢组大鼠行双侧卵巢摘除手术,将双侧卵巢摘除并存活的大鼠按体重随机分为5组(n=10):模型组,西药组(戊酸雌二醇0.08mg/kg),清心滋肾汤低剂量组(生药8g/kg),清心滋肾汤中剂量组(生药16g/kg)、清心滋肾汤高剂量组(生药32g/kg);另有假手术组给予生理盐水。以上各组均取腹主动脉血测定NO、ET的含量。3.采用Phenomenex Kinetex C18(100 mm×4.60 mm,2.6μm)色谱柱分离,流动相为甲醇、乙腈和0.2%甲酸溶液,梯度洗脱,检测波长为245 nm和280 nm,柱温40℃。建立10批清心滋肾汤水煎液的HPLC指纹图谱,并进行相似度评价、对共有峰进行归属及指认,并测定指认出的15个成分的含量。结果:1.与假手术组比较,模型组大鼠的尾部皮肤温度在摘除双侧卵巢后出现明显升高的过程(P<0.05);与模型组比较,给药1-4周,西药组(戊酸雌二醇)、清心滋肾汤中剂量组、清心滋肾汤高剂量组的大鼠尾部皮肤温度显著降低(P<0.05);给药2-4周,清心滋肾汤低剂量组的大鼠尾部皮肤温度明显降低(P<0.05)。给药3-4周,清心滋肾汤组与西药组(戊酸雌二醇)大鼠尾部皮肤温度均显著降低,差异无统计学意义(P>0.05)。2.与假手术组比较,模型组NO及NO/ET降低,有显著性差异(p<0.05),ET有升高趋势;用药后,清心滋肾汤低、中、高剂量组大鼠NO及NO/ET(P<0.001)均显著性升高,ET有降低趋势。3.10批清心滋肾方水煎液HPLC指纹图谱相似度在0.923~0.998,指认出共有峰33个,其中黄连中有7个峰(P11、P14~P16、P24、P29、P30),莲子心(P7、P19)及酸枣仁(P14、P21)中各有 2 个峰,丹参(P4、P5、P10、P17、P18、P28、P31~P33)及山茱萸(P1~P3、P6、P8、P9、P12、P13、P20)中各有9个峰,其余5个共有峰(P22、P23、P25~P27)来源未明确,而生地黄、钩藤及浮小麦对共有峰贡献不明显。通过与对照品比对,指认出为没食子酸(P2)、5-羟甲基糠醛(P3)、丹参素(P4)、原儿茶醛(P5)、莫诺苷(P9)、咖啡酸(P10)、马鞭草苷(P12)、马钱苷(P13)、木兰花碱(P14)、黄连碱(P24)、紫草酸(P28)、小檗碱(P29)、巴马汀(P30)、丹酚酸B(P31)和丹酚酸E(P33),并对这15种成分进行含量测定,定量结果分别为158.3~248.2、133.6~321.3、45.9~166.0、24.3~38.6、800.7~1 263.6、26.6~54.9、44.5~108.2、470.4~757.3、85.6~178.6、11.1~34.2、56.2~106.4、25.9~138.9、21.0~59.2、951.6~2 244.7、38.6~92.8μg/g。结论:1.清心滋肾汤可以显著降低绝经期潮热大鼠的尾部皮肤温度,有统计学意义。2.清心滋肾汤可以升高绝经期潮热大鼠血清NO的水平及调整NO/ET,有统计学意义3.所建立的清心滋肾方水煎液HPLC指纹图谱及含量测定方法稳定性、重复性好,可为清心滋肾方质量控制和评价提供参考。
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