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喉鳞癌是头颈部常见恶性肿瘤,其发病率呈逐年上升趋势。目前,对喉癌等恶性肿瘤的传统治疗方法是手术、放疗和化疗。这些传统的方法对于治疗晚期的喉癌病人没有很大意义,所以近年来兴起综合治疗备受关注,干扰素就是其中一种。研究发现,作为干扰素可诱导家族HIN-200蛋白家族成员,人中的IFI16蛋白和小鼠中的p202蛋白都与系统性红斑狼疮(SLE)发病有关。多个研究证明HIN-200家族蛋白具有抑制细胞增殖的作用。由于这个原因,研究人员开始着手于研究IFI16基因的抗肿瘤作用。目前已知IFI16基因具有抗乳腺癌,前列腺癌的作用,并且在头颈部鳞状细胞癌HNO136细胞中表现出抑制细胞生长的作用。本研究将RT-PCR扩增得到的IFI16基因构建到真核表达质粒pVR1012,得到PVR1012-IFI16重组质粒,用脂质体将其转染导入Hep-2细胞,半定量RT-PCR分析IFI16基因在Hep-2细胞中的外来表达情况,细胞生长曲线绘制法及MTT法测定IFI16基因外来表达对Hep-2细胞增殖的影响,流式细胞术检测IFI16基因外来表达对Hep-2细胞周期及凋亡的影响；合成针对IFI16基因的shRNA,构建慢病毒表达载体pGreen Puro-IFI16-shRNA,用磷酸钙将其转染Hep-2细胞构建稳定表达这个载体的Hep-2细胞系.半定量RT-PCR分析结果发现,pVR1012-IFI16重组质粒转染的Hep-2细胞IFI16基因mRNA水平显著升高；细胞生长曲线测定结果发现,第2天开始pVR1012-IFI16重组质粒转染的Hep-2细胞生长变慢,至第3天时pVR1012-IFI16重组质粒转染Hep-2细胞其生长速度明显变慢,与mock转染及空载体转染对照细胞相比差异显著(P<0.05)；MTT测定结果发现,pVR1012-IFI16重组质粒转染Hep-2细胞48h后,其相对活细胞数目显著降低,与mock转染及空载体转染对照细胞相比差异十分显著(P<0.05及P<0.01)；流式细胞术检测结果发现,与mock转染及空载体转染对照细胞相比,pVR1012-IFI16重组质粒转染48h后Hep-2细胞亚GO期细胞比例以及凋亡细胞比例都显著升高。上述研究结果说明,构建得到的pVR1012-IFI16重组质粒能在Hep-2细胞中外来表达IFI16基因,IFI16基因外来表达抑制Hep-2细胞增殖、阻滞Hep-2细胞周期在亚GO期并诱导Hep-2细胞发生凋亡；成功构建得到pGreen Puro-IFI16-shRNA,并且构建稳定表达pGreen Puro-control-shRNA的Hep-2细胞系,稳定表达pGreen Puro-IFI16-shRNA也已经在构建当中。本实验希望采用外来过表达技术来研究IFI16基因对于Hep-2细胞生长的影响,并且希望通过外来沉默技术作为辅助,验证IFI16基因在喉癌Hep-2细胞中的作用。从上述结果中看出IFI16基因抑制喉癌Hep-2细胞生长增殖方面的作用,并且使用脂质体转染,流式细胞仪等检测实验有效地验证这个猜测。这将为进一步阐明IFI16基因抑制喉癌Hep-2细胞生长增殖的分子机制奠定基础。