【摘 要】
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荧光检测法具备灵敏度高、可视性强、操作简单、选择性好、成本低、对细胞损伤小等优点,在生命科学及生物分析等领域成为不可或缺的检测手段。香豆素类化合物因其光稳定性好、荧光量子产率高和Stokes位移大等优点常被作为荧光团。本论文在香豆素结构的基础上,引入半花菁骨架构建香豆素-半花菁杂合体荧光团CHM-OH,并基于该荧光团设计合成了两个荧光探针,分别用于检测线粒体中的生物硫醇和过氧化氢(H2O2)。主要
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荧光检测法具备灵敏度高、可视性强、操作简单、选择性好、成本低、对细胞损伤小等优点,在生命科学及生物分析等领域成为不可或缺的检测手段。香豆素类化合物因其光稳定性好、荧光量子产率高和Stokes位移大等优点常被作为荧光团。本论文在香豆素结构的基础上,引入半花菁骨架构建香豆素-半花菁杂合体荧光团CHM-OH,并基于该荧光团设计合成了两个荧光探针,分别用于检测线粒体中的生物硫醇和过氧化氢(H2O2)。主要内容如下:(1)线粒体中的生物硫醇例如半胱氨酸(Cys)、同型半胱氨酸(Hcy)和谷胱甘肽(GSH)对维持线粒体的氧化还原稳态至关重要,在众多的生理和病理过程中扮演着重要的角色。因此,发展荧光探针检测线粒体中的生物硫醇具有重要的意义。我们以CHM-OH为荧光团、丙烯酸酯单元为识别基团和3H-吲哚正离子为线粒体靶向基团设计合成了荧光探针CHM1。该探针能够高选择性地检测生物硫醇。它在PBS(10 m M,pH=7.4)缓冲体系中对Cys的响应时间和检测限分别为5 min和0.27μM。此外,Cys诱导了测试体系明显的颜色变化:从浅黄到紫色,简便了裸眼观察。该探针也被成功应用于成像He La细胞线粒体中生物硫醇的产生。(2)基于线粒体中H2O2的生理和病理功能,发展荧光探针检测线粒体中H2O2引起了研究者足够的兴趣。我们以CHM-OH为荧光团、硼酸酯为分子开关和3H-吲哚正离子为线粒体靶向基团设计合成了荧光探针CHM2。该探针能够选择性地检测H2O2,在PBS(10 m M,pH=7.4)缓冲体系中对H2O2的响应时间和检测限分别为20 min和1.63μM。该探针对检测H2O2表现出众多优良的性质:如裸眼观察、红色荧光响应、良好的水溶性等。荧光共定位实验证实:它能有效地靶向He La细胞线粒体,检测外源性和内源性H2O2的产生。
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