第一部分GBS相关的Cj在豚鼠体内定植的研究目的：1分离豚鼠胃肠道内的空肠弯曲菌；2确定空肠弯曲菌在豚鼠体内定植的部位；3研究空肠弯曲菌在豚鼠胃肠道不同部位的形态与生理变化。方法：1培养空肠弯曲菌：河北医科大学第二医院神经内科实验室-80℃冰箱冻存的空肠弯曲菌溶化后，取500ul菌液，加布氏肉汤培养基5-8ml，置于三气培养箱，在微需氧环境（O25%, CO210%, N285%)，42℃条件下，培养24小时后，传代至哥伦比亚血培养基，相同培养条件培养24-48小时。2鉴定空肠弯曲菌：采用空肠弯曲菌形态学、氧化酶试验、马尿酸钠水解试验、PCR等方法，鉴定空肠弯曲菌。3实验动物分组：采用6周龄、体重均在250-350g的Hartley豚鼠，雌雄不限，共15只,随机分为实验组12只和对照组3只，实验组分为分离组、定植组各6只。4给菌途径及浓度：复苏后的空肠弯曲菌在哥伦比亚血培养基上培养24-48小时，刮取细菌至布氏肉汤培养基,配制成3×108CFU/mL菌悬液，豚鼠禁食12小时不禁水,实验组取2mL菌悬液灌喂豚鼠，灌喂结束即给食水。对照组豚鼠取2ml布氏肉汤培养基灌喂，其他处理同对照组。5解剖实验动物：饲养分离组豚鼠48小时、饲养定植组豚鼠7天，解剖豚鼠，称重后,用4%水合氯醛腹腔注射麻醉动物(10ul/g)，心脏放血法处死。常规皮肤消毒后打开腹腔，无菌取胃肠道组织,胃部及盲肠取四个不同部位的标本，小肠和大肠每5-10cm取一个标本。6胃肠道组织及胃肠道内容物的分离培养：取肠道组织长度为0.5cm左右加至布氏肉汤选择培养基5-8ml增菌，微需氧、42℃条件下培养24小时，传代至哥伦比亚血选择培养基，相同条件培养24-48小时，观察菌落形态，挑选可疑目的菌落，传代至哥伦比亚选择培养基纯化菌株。7分离得到的细菌鉴定：采用空肠弯曲菌形态学、氧化酶试验、马尿酸钠水解试验、PCR等方法，鉴定空肠弯曲菌。8胃肠道内容物的涂片、革兰染色：取0.5cm3胃肠道内容物，放于载玻片上，用无菌棉签涂片，革兰染色后，光学显微镜1000倍观察胃肠道各部位有无似空肠弯曲菌形态的细菌以及该细菌在胃肠道不同部位的形态变化，同时了解该胃肠道部位的内环境。9统计能够分离出空肠弯曲菌的胃肠道部位及数量。结果：1分离组灌菌后48小时解剖豚鼠，培养胃肠道组织及内容物，在肠道各段分离得到空肠弯曲菌（见附表1）。2定植组在灌菌7天后解剖豚鼠，培养胃肠道组织及内容物，在肠道各段分离得到空肠弯曲菌（见附表2）。3对照组分别在灌布氏肉汤培养基后48小时、7天解剖豚鼠，培养胃肠道组织及内容物，培养的部位同分离组和定植组，未分离得到空肠弯曲菌。4对照组胃肠道内容物涂片革兰染色，光学显微镜1000倍镜检，未观察到似空肠弯曲菌形态的细菌。5灌菌后48小时解剖豚鼠，胃肠道组织涂片革兰染色，光学显微镜镜检，观察到似空肠弯曲菌形态的细菌；在不同胃肠道部位，不能分辨空肠弯曲菌的形态变化，尤其在盲肠和结肠部位细菌较多不易明确辨别空肠弯曲菌。结论：1清洁级健康豚鼠胃肠道内无空肠弯曲菌。2给豚鼠灌喂空肠弯曲菌后，空肠弯曲菌能在豚鼠胃肠道内长期存活。3胃肠道内容物直接涂片革兰染色，不能辨别空肠弯曲菌形态，空肠弯曲菌形态较细小，易被其他肠道细菌覆盖。第二部分病人结肠内Cj的分离目的：1了解肠道造瘘病人瘘口排出物有无空肠弯曲菌；2了解非腹泻、非吉兰-巴雷综合征人群中，造瘘瘘口排出物的空肠弯曲菌分离率是否高于非造瘘人群粪便标本空肠弯曲菌的分离率；3距离盲肠越近的结肠瘘口排出物分离得到空肠弯曲菌的几率是否越大。方法：1标本来源：2011年9月至10月河北医科大学第二医院小儿外科临床诊断为先天性巨结肠3例患儿，造瘘口排出物或肛门排出粪便为标本。2收集标本：无菌棉签收集患儿瘘口或肛门排出物，放入盛有5-8ml布氏肉汤培养基的西林瓶中，自排出物排出至放入西林瓶中时间在2小时以内。3增菌：装有标本的西林瓶置于三气培养箱内，微需氧环境(O25%,CO210%, N285%)，42℃条件下，增菌24小时。4传代：接种环沾取增菌24小时的增菌液一环，采用分区画法，传代至哥伦比亚血平板，微需氧环境，42℃条件下培养24-48小时。5纯化：观察哥伦比亚血平板生长细菌的形态，接种环挑取可疑单菌落至哥伦比亚血平板纯化细菌，每块平板挑取3个菌落，增加挑选目的菌株的阳性率。6细菌的鉴定：.包括细菌菌落形态、革兰染色镜检、生化鉴定，必要时行分子鉴定。7保存细菌：分离得到的细菌保存至-80℃冰箱。结果：13例病人瘘口排出物按照本次实验方法能分离得到细菌；2经鉴定分离得到细小菌落的细菌马尿酸钠水解试验阳性，革兰染色镜检为革兰阳性球菌。33例病人本次实验方法未分离得到空肠弯曲菌。结论：本实验方法不适合结肠造瘘病人空肠弯曲菌的分离培养。