作物枯萎病生防芽胞杆菌筛选及其抗菌肽的分析

来源 :福建农林大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:dickensking
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植物青枯病病害给全世界农作物造成了严重的经济损失,化学农药剂,杀细菌剂是控制植物病害最有效的手段。然而化学药品的滥用和误用对目前环境以及人类健康造成了严重的威胁。目前,植物病害生物防治已是最好的替代方法。所有微生物菌剂中,芽胞杆菌能产生具有强抗逆性的芽胞,产生强有效的抗菌化合物,对农作物还具有促生作用,因此,芽孢杆菌是生物防治中最受青睐的菌剂。本研究,拟从福建省农科院农业生物资源研究所农业微生物中心保藏的芽胞杆菌菌种库中,采用点样法和打孔法筛选获得对抗青枯菌和镰刀菌均具有拮抗作用的芽胞杆菌,通过LC-MS-MS分离鉴定具有拮抗作用的物质成分,探索分析产拮抗物质的最佳条件,并对其拮抗效果进行评价。具体研究结果如下:1.拮抗芽胞杆菌的筛选与鉴定筛选获得了 15株菌对青枯菌和枯萎病原菌具有拮抗作用,其中菌株FJAT-42192抑菌效果最佳。基于菌落形态特征、生理生化特征和16S rRNA基因序列系统发育分析得出,初步鉴定菌株FJAT-42192为甲基营养型芽胞杆菌(Bacillus methylotrophicus)。2.拮抗物质的分离与鉴定。通过浓盐酸提取法获得了菌株FJAT-42192上清发酵液中的粗肽。打孔法实验结果表明,粗肽对青枯菌和镰刀菌均有很强的抑菌作用,对青枯菌的抑菌圈直径达20 mm。PCR扩增反应显示菌株FJAT-42192具有合成surfcatin、iturin和fengycin三种抗生素物质的基因功能。LC-MS-MS检测峰图解析得出菌株能分泌产生表面活性素surf cat in([M+Na]+at m/z 1016-1030-1044-1058)和丰原素 fengycin([M+H]+at m/z 1463.9-1477.9 and m/z 1492.9-1506)和伊枯草素 iturin([M+Na]+at m/z 1065-1079-1093),fengycin([M+H]+at m/z 1463.9-1477.9 and m/z 1492.9-1506)三种活性成分。3.拮抗物质的活性特性及室内盆栽试验验证FJAT-42192抗菌物质的pH活性范围为2.2-8,温度为60℃、80℃和100℃时处理30 min到1 h时仍具有活性。菌株产拮抗物质的最佳条件为pH 6、25℃至30℃培养24 h。发酵培养基检测,拮抗剂活性最高的为CGP培养基(成分为胰蛋白胨20 g/L、果糖20 g/L和的氯化钠10g/L室内盆栽实验发现,FJAT-42192能有效降低番茄苗青枯病的发生,枯萎病发生率降低50%.综上所述,本研究筛选获得的芽胞杆菌对青枯病和枯萎病菌具有较强的拮抗活性,能同时产生surfactin、iturin和fengycin三种脂肽。室内盆栽实验表明该菌能有效降低番茄青枯病的发生率。本研究为农作物病害防治提供了理论基础和科学依据。
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