咖啡因降解菌的筛选与发酵

来源 :大连工业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lixiang1989521
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咖啡因是一种中枢神经兴奋剂,可以短时间缓解疲劳和恢复精力,因此有咖啡因成分的咖啡、软饮料、茶及能量饮料销量非常可观,而咖啡皮和茶渣等各种咖啡及茶饮料的副产品每年也大量产生,这些物质通常被视为废弃物而造成环境污染。一些茶渣可用作肥料,但是咖啡因的存在可以改变土壤特性,引起土地盐碱化,影响作物生长。茶渣富含糖类和蛋白质,可以制成饲料而代替谷物等传统的动物饲料,但是由于咖啡因的存在使这种用途受到一定限制。本研究从茶园中采取土样,以咖啡因作为唯一碳源和氮源对咖啡因降解菌株进行初筛,从挑选的50株菌中初筛得到10株生长较好的菌株,将10株菌通过液体培养基咖啡因降解试验进行复筛,利用紫外分光光度法最终筛选出一株咖啡因降解能力最强的菌株CF-1,其在72 h内可将咖啡因几乎完全降解,为微生物脱除咖啡因提供了参考。对筛选的咖啡因降解菌CF-1进行鉴定,通过对该菌株的细胞形态以及革兰氏染色观察,对分离得到的咖啡因降解菌16SrDNA扩增、测序,并进行同源性分析,得到10株同源性较高的菌株,通过系统发育树的构建,以及碳同化能力检测、接触酶试验、氧化酶试验等生理生化实验,认定所筛菌属于伯克霍尔德氏菌属,命名为Burkholderia sacchari CF-1。以CF-1为出发菌株,对其培养条件进行优化,最终确定当pH为5.5,35 ℃培养3 d,通风量较大时菌体生长较好,将优化后的菌株以一定接种量接种于湿茶渣中进行发酵,确定发酵的最佳条件是时间6 h、温度40 ℃、pH 4.5、含水量为88.51%,此时茶渣中的咖啡因降解率最高,经优化明显提升了茶渣中的咖啡因降解率,其在最佳条件下咖啡因的降解率可达78.6%,此法为解决茶渣中含有过多的咖啡因问题提供了参考,微生物法降解咖啡因,弥补物理化学方法脱咖啡因的不足,具有十分重要的经济效益和社会效益。
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