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肝癌(HCC)是一种全球发病率较高的恶性肿瘤,全球每年的新发病例超过600000例。肝癌根据其疾病的恶性程度划分,在所有的肿瘤中排名第五,致死率居全球第三。乙型肝炎病毒(HBV)感染是肝癌形成的重要诱因。随着肝癌研究的深化以及现代技术的发展,发现肝癌在缓慢的形成的过程中,往往会造成许多分子和信号通路的改变。因此,从微观分子的角度探究肝癌发生发展的机制,尤其是HBV感染导致的分子及信号通路的改变,并将特异的分子看作抗肿瘤研究新的靶点,可以为肝癌的临床治疗提供新的思路。长链非编码RNA(LncRNA)是一类内源性RNA,从细胞中转录出来的转录本长度大于200nt,在进化上保守性较差,能够在多个水平上调控基因的表达,包括染色质修饰、转录和转录后加工。近年研究表明,大量的LncRNAs具有复杂的生物学功能,而且参与到许多癌症的形成过程。例如,结直肠癌组织与对应的非癌组织相比,HOTAIR的表达水平有明显上升,它可以通过直接与PRC2复合体的结合,影响依赖PRC2的染色质修饰,进而调节多种基因的表达。通过对比HBx转基因小鼠以及对照组小鼠肝脏中lncRNA量的差异,研究者发现LncRNA Dreh表达量在转基因小鼠中显著下调,并且这种下调与鼠龄和性别没有相关性,由HBx抑制表达的LncRNAs Dreh能够通过抑制中间纤维蛋白Vimentin的表达来调控细胞骨架的修饰状况,从而使HCC的生长、转移均处在一个抑制的状态。本课题进行了以下3部分的研究:(1)通过RNA-seq检测肝癌细胞系HepG2及整合了 HBV基因组的肝癌细胞系4D14中差异表达的LncRNAs,进而利用定量PCR确定了一条在4D14中显著下调的长链非编码RNA,命名为LncRNA-DR4作为本课题的研究对象。(2)构建了 LncRNA-DR4过表达的肝癌细胞系,通过CCK8,细胞周期等实验,发现LncRNA-DR4的过量表达能够显著抑制肝癌细胞系HepG2的细胞增殖,且这种抑制作用可能是HepG2细胞周期中S期的阻滞造成的。(3)利用定量PCR确定了 HBV特有基因HBx与LncRNA-DR4表达的负相关性,进一步的荧光素酶活性实验,发现HBx在转录水平上下调了LncRNA-DR4表达,并且这种调控可能依赖p53蛋白。总之,我们鉴定了一条在HBV阳性细胞系中下调的长链非编码RNA,命名为LncRNA-DR4。确定了 HBx蛋白对LncRNA-DR4的负调控作用,并且这种调控在转录水平上进行,这种调控作用是依赖p53的。另外,对于LncRNA-DR4的生物学功能,我们发现过表达LncRNA-DR4能显著抑制肝癌细胞的增殖,引起S期细胞阻滞。