论文部分内容阅读
桦褐孔菌是一种药用价值很高的白腐真菌，被称为“桦树中的褐色灵芝”，具有许多类似于灵芝的功效，如抗肿瘤、免疫调节、降血糖、抗氧化等生物活性，近年来受到了学术界的广泛关注。目前，桦褐孔菌在摇瓶培养的条件下，以积累初生代谢产物为主，次级代谢产物无论在种类还是积累上都无法达到理想的水平。近年来，添加诱导剂是一种很好的策略，已经广泛用于植物和少数真菌如灵芝中，来促进菌丝体生长和次级代谢产物的积累。本论文采用两种方式改善生物量和三萜化合物产量，即利用复杂的培养基和添加诱导剂，以菌丝体量、总三萜以及5种重要桦褐孔菌三萜单体含量为指标，对比分析对桦褐孔菌液体深层发酵制备三萜化合物的影响。研究结果如下：1.利用复杂培养基得到的菌丝体量和总三萜含量均明显优于基础培养基的，最大值分别达10.31±0.31g/L和74.98±3.18mg/g菌丝体干重，比基础培养基中的提高10.1%和15.5%。在总三萜浓度为0.5-3.5mg/mL时，进行抗氧化活性测试。复杂培养中总三萜提取物的IC50为1.77mg/mL比基础培养基中的IC50（2.18mg/mL）小，说明优化培养基中总三萜提取物的抗氧化活性比较强。2.研究茉莉酸甲酯（MeJA）的不同添加时间和助剂对三萜化合物的影响。当第6天添加50μM的MeJA（吐温-20为助剂）时，总三萜产量的促进效果最好，达81.74±2.46mg/100mL；对菌丝体有一定的抑制作用，菌丝体量最大为8.48±0.11g/L。另一方面，第6天添加50μM的MeJA（吐温-80为助剂）到培养基中，其最大菌丝体量为10.14±0.2g/L，总三萜产量最大为100.72±2.29mg/100mL，表明吐温-80是MeJA的最佳助剂。3.考察3种脂肪酸（亚油酸、油酸和软脂酸）对桦褐孔菌发酵产三萜的影响。表明三种脂肪酸均能促进桦褐孔菌在发酵过程中总三萜的积累，但积累程度存在一定差异。综合菌丝体量和总三萜产量，采用油酸添加的效果最佳。最佳浓度为1.5mg/L时，获得菌丝体为1.13±0.03g/100mL，总三萜产量为94.71±1.42mg/100mL。4.利用HPLC定量复杂培养基中得到的betulin、trametenolic acid、inotodiol、3β-hydroxy-lanosta-8,24-dien-21-al和lanosterol含量达到最大值比基础培养基中所对应的各个成分增加了3.3、2.1、0.6、1.0和1.6倍；MeJA（吐温-80为助剂）的添加到培养基后，各个三萜含量分别提高了20.9、5.0、3.6、4.2和3.7倍；油酸作为诱导剂，比基础培养基菌丝体内的各个三萜含量分别提高了18.3、4.1、2.5、2.6和1.76倍。综上所述，油酸添加到培养基中培养，其菌丝体量达到最大值；从总三萜含量的角度看，添加MeJA（吐温-80作为助剂）后，其总三萜产量和各个三萜组分相对比较高。综上所述，MeJA（吐温-80作为助剂）是促进三萜化合物的产量的最佳诱导剂。