不同治法方药对正常环境和湿热环境下流感病毒FM1感染小鼠TLR7/NF-κB信号通路的影响

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目的流感病毒是一种单链核糖核酸(ss RNA)病毒,可以在人类和动物中传播。每年全世界大约有6亿人患上流感,已经成为一种严重的公共卫生和经济问题。TLR7(Toll样受体7)通过识别病毒ss RNA,完成体内固有免疫应答的启动。本研究旨在探讨三种中药复方治疗正常环境和湿热环境下流感病毒FM1感染小鼠的免疫学机制以及对小鼠肺部TLR7/NF-κB信号通路的影响,从“环境—机体—病原体”的角度,进一步解释“同病异治”的科学原理,为今后研发相关的抗流感病毒药物提供理论依据和技术平台。方法研究三种中药复方对抑制甲型流感病毒FM1感染和改善小鼠肺部炎症的影响。将6-8周龄SPF级C57BL/6小鼠和TLR7基因敲除小鼠(TLR7 KO)随机分为6组:空白对照组;模型组;奥司他韦组;银翘散组;桂枝麻黄各半汤组;新加香薷饮组。小鼠分别在正常环境和湿热环境中造模。病毒感染后,对小鼠进行干预,每日观察并记录小鼠的物理参数(一般状况、体重、死亡率等)并进行评价。于病毒感染后的第6天,进行取材。统计各组小鼠的肺指数并观察肺组织的病理改变。RT-q PCR用于测量病毒载量以及TLR7信号通路中关键因子TLR7,My D88和NF-κB m RNA在肺组织中的表达情况。Western-blot检测TLR7信号通路中TLR7,My D88和NF-κB的蛋白表达量。流式细胞术用于检测小鼠脾脏中Th17/Treg细胞的比例。结果新加香薷饮可以有效缓解湿热环境下C57BL/6小鼠肺部炎症,桂枝麻黄各半汤和银翘散可以明显减轻正常环境下C57BL/6小鼠肺部炎症,并且显著下调Th17/Treg的比例。RT-q PCR和Western-blot检测结果显示,在湿热环境中,新加香薷饮可下调流感C57BL/6小鼠肺中TLR7通路中TLR7,My D88和NF-κB的表达(p<0.05)。而在正常环境中,桂枝麻黄各半汤和银翘散可显著下调流感C57BL/6小鼠肺中TLR7通路中TLR7,My D88和NF-κB的表达。此外,在TLR7基因敲除鼠中,三种中药复方组的小鼠肺组织中病毒载量与模型组比较无差异,且疗效很差。结论桂枝麻黄各半汤和银翘散在正常环境中对甲型流感病毒FM1株感染的小鼠有较好的治疗作用,而新加香薷饮在湿热环境中有明显的治疗效果,并且均可通过下调TLR7信号通路的关键因子发挥抗流感作用。
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