目的：　　越来越多的研究认为转录因子MafB在多种肿瘤中高表达，与恶性程度和不良预后密切关联。MafB蛋白可以通过泛素-蛋白酶体途径（UPP）降解，因此通过UPP　　对MafB蛋白水平进行调控对MM的治疗具有非常重要的意义。目前对MafB蛋白发生泛素化修饰过程中涉及到的一系列酶尚未见报道，本研究利用亲和纯化偶联质谱法（AP-MS）筛选并鉴定能够调控MafB蛋白泛素化过程的去泛素化酶（DUB），并阐明该DUB对MafB蛋白稳定性调控的分子机制，从而为治疗MM提供更多的理论依据。　　方法：　　1.在HEK293T细胞中过表达MafB质粒，采用免疫共沉淀分离与MafB的相互作用蛋白质，进一步采用质谱学分析和鉴定蛋白质，通过比对数据库信息分析质谱中检测到的蛋白质，找到与MafB蛋白泛素化过程相关的去泛素化酶；　　2.通过免疫共沉淀（Co-IP）验证USP7和MafB的相互作用；　　3.通过免疫沉淀（IP）和Western Blot（WB）方法分析USP7对内源性和外源性MafB蛋白泛素化水平的调控作用，通过WB方法检测USP7对MafB蛋白稳定性的影响；　　4.使用放线菌酮（Cycloheximide, CHX）处理细胞后分析USP7对MafB蛋白半衰期的影响；　　5.利用分子克隆方法构建USP7的功能性截短体，通过IP和WB方法检测USP7和MafB的相互作用结构域；　　6.利用分子克隆方法构建MafB特异性识别元件，通过荧光素酶活性实验检测USP7对MafB转录活性的影响；　　7.收集临床多发性骨髓瘤病人样本，用反转录PCR（RT-PCR）检测分析病人样本中USP7在mRNA水平的表达情况；收集包括多发性骨髓瘤细胞株在内的多种肿瘤细胞株，Western Blot检测USP7以及MafB的蛋白表达情况；　　8.使用小分子抑制剂P5091抑制USP7功能，通过WB、IP方法检测MafB蛋白泛素化的水平。　　结果：　　1. AP-MS分析在MafB的共沉淀复合物中存在多个与泛素化关联的蛋白质，其中之一为去泛素化酶 USP7，提示 USP7与 MafB蛋白可能存在相互作用。其中 MafB特异性肽段覆盖率达到50％，USP7特异性肽段覆盖率为12%。这一假说在随后的细胞试验中得到了证实。在工具细胞HEK293T中共转染MafB和USP7的质粒，24小时后提取细胞总蛋白，在MafB的免疫沉淀复合物中WB证实了UPS7的存在。同时在HeLa细胞中转染USP7发现USP7能与内源性的MafB相互结合。　　2.在HEK293T细胞中共转染USP7和MafB或者在HeLa细胞中转染USP7质粒，然后免疫沉淀分析，发现USP7能降低外源性和内源性MafB蛋白的泛素化水平。　　3.由于MafB可以经由泛素蛋白酶体降解，进一步的研究发现USP7增强MafB蛋白稳定性呈浓度和时间依赖性趋势，同时延长MafB的半衰期。值得注意的是USP7也能增加同属于Maf家族的MafA和c-Maf蛋白的稳定性。　　4.为了阐明USP7是否能调节Maf蛋白的基因转录调节活性，我们构建了Maf蛋白特异性响应单元驱动的荧光素酶报告基因系统，结果发现USP7能显著性提高促进MafB转录活性，并且发现这一转录活性能被USP7的抑制剂P5091所下调，进一步证明USP7对Maf蛋白的调节作用。　　5.USP7截短体与MafB蛋白质免疫共沉淀结果显示USP7的TRAF结构域和HUBL结构域能够和MafB发生相互作用，TRAF结构域能够明显降低MafB蛋白的泛素化水平。　　6.在细胞MafB蛋白的表达谱的研究中发现多发性骨髓瘤病人样本中USP7和MafB的mRNA表达水平高于正常人，并且USP7的表达水平与MafB蛋白质的稳定的表达呈高度一致性。进一步收集多种肿瘤细胞株WB检测结果显示在多种肿瘤细胞中USP7和MafB的蛋白水平均高表达，在MafB蛋白高表达的细胞株中USP7蛋白也高表达，结果提示我们两者蛋白表达存在相关性。　　7.由于USP7的去泛素化酶作用可以被P5091的小分子物质所抑制，抑制USP7功能后，MafB的泛素化水平明显上调、转录活性增强；在 RPMI-8226细胞中处理P5091后，免疫沉淀结果显示 P5091亦上调RPMI-8226内源性MafB蛋白泛素化水平。　　结论：　　本研究利用AP-MS、WB以及IP等实验方法发现USP7能够结合并使MafB蛋白泛素水平降低。USP7因而增强了MafB的蛋白稳定性，提高了MafB转录活性。进一步研究表明USP7主要通过其TRAF结构域和HUBL结构域与MafB发生相互作用，TRAF结构域发挥重要的去泛素化功能。USP7在MM等多种肿瘤细胞中高表达，与MafB的蛋白质水平呈一致性。抑制USP7能使MafB的蛋白质水平下调，并抑制MafB的转录活性。