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目的:从胆汁酸自身反馈调节角度探讨利胆合剂对α-萘异硫氰酸酯(ANIT)诱导的急性肝内胆汁淤积模型幼龄大鼠FXR、SHP、UGT2B4、BSEP基因及蛋白表达的影响,观察大鼠血清生化指标及肝脏组织病理变化,明确利胆合剂治疗婴儿胆汁淤积性肝病的作用靶点。研究内容与方法:1.造模:根据淤胆型肝炎动物模型的建立方法,将30只雌雄各半、体重70-90g的SPF级离乳后幼龄SD大鼠,入住SPF屏障系统中饲养,不同药物干预第5天时,除正常组外,一次性予ANIT灌胃建立肝内胆汁淤积模型。2.动物分组及干预方法:将30只雌雄各半SPF级离乳后幼龄SD大鼠,适应性喂养3天后予称重,将大鼠按体重随机分为正常组、模型组、熊去氧胆酸组、利胆合剂高剂量组、利胆合剂低剂量组,每组六只,雌雄各半。正常组(N):予生理盐水连续灌胃6天模型组(M):予生理盐水灌胃4天,第5天予ANIT溶液(1ml/100g)灌胃给药1次熊去氧胆酸组(UDCA):0.3%熊去氧胆酸(2ml/100g)灌胃6天,第5天灌胃后间隔4-6小时另予ANIT溶液(1ml/100g)灌胃给药1次利胆合剂高剂量组(LDM-H):利胆合剂(7.4g/2ml)灌胃6天,第5天灌胃后间隔4-6小时另予ANIT溶液(1ml/100g)灌胃给药1次利胆合剂低剂量组(LDM-L):利胆合剂(7.4g/4ml)灌胃6天,第5天灌胃后间隔4-6小时另予ANIT溶液1ml/100g)灌胃给药1次3.检测指标:(1)检测大鼠的TBIL、DBIL、TBA、ALT、AST、γ-GT、ALP;(2)各组大鼠肝脏苏木精伊红染色,观察肝脏形态结构变化。(3)实时PCR方法检测肝脏FXR、SHP、UGT2B4、BSEP基因表达水平。(4)Western blotting方法检测肝脏FXR、SHP、UGT2B4、BSEP蛋白表达水平。结果:1.利胆合剂高剂量组可以改善肝内胆汁淤积的症状,降低TBIL、DBIL、TBA、ALT、AST、γ-GT、ALP的水平优于熊去氧胆酸组,并能减轻胆汁淤积造成的肝脏损害、修复受损的肝脏组织,有明显的利胆保肝作用。2.利胆合剂高剂量组、利胆合剂低剂量组、熊去氧胆酸组FXR、SHP、UGT2B4、BSEP mRNA表达水平均显著高于模型组;利胆合剂高剂量组、利胆合剂低剂量组FXR、SHP、UGT2B4、BSEP mRNA表达水平显著高于熊去氧胆酸组;且利胆合剂高剂量组FXR、SHP、UGT2B4、BSEP mRNA表达水平均高于利胆合剂低剂量组。3.利胆合剂高剂量组FXR、SHP、UGT2B4、BSEP蛋白表达水平高于熊去氧胆酸组,利胆合剂低剂量组FXR、SHP、UGT2B4、BSEP蛋白表达水平与熊去氧胆酸组相比两者无显著差异;且利胆合剂高剂量组SHP、UGT2B4蛋白表达水平显著高于利胆合剂低剂量组。结论:利胆合剂对ANIT诱导的急性肝内胆汁淤积模型幼龄大鼠具有保肝利胆的功效,对胆汁淤积及其引起的肝损害有明显的治疗作用,其机制可能为利胆合剂通过干预FXR上调SHP、UGT2B4、BSEP mRNA及蛋白的表达来促进胆汁酸在肝内的排泄,修复胆汁淤积引起的肝损害。