【摘 要】
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前人研究发现 BCAS2 基因(Breast cancer amplified sequence 2,BCAS2)参与了小鼠精原干细胞中的可变剪接,该基因的缺失会导致小鼠精原细胞减数分裂启动异常,生育能力丧失。而在公猪睾丸中的功能表达情况尚不清楚。本试验以安徽地方猪圩公猪为材料,采取初情期启动前后睾丸组织,分析BCAS2基因的表达差异,检测BCAS2在睾丸组织中的蛋白表达水平及定位,结合初情期启动
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前人研究发现 BCAS2 基因(Breast cancer amplified sequence 2,BCAS2)参与了小鼠精原干细胞中的可变剪接,该基因的缺失会导致小鼠精原细胞减数分裂启动异常,生育能力丧失。而在公猪睾丸中的功能表达情况尚不清楚。本试验以安徽地方猪圩公猪为材料,采取初情期启动前后睾丸组织,分析BCAS2基因的表达差异,检测BCAS2在睾丸组织中的蛋白表达水平及定位,结合初情期启动前后BCAS2甲基化水平,从而分析BCAS2基因在圩公猪睾丸组织中的表达规律以及对圩公猪初情期启动的影响。使用实时荧光定量PCR(quantitative Real time PCR,qRT-PCR)方法检测圩公猪初情期启动前后睾丸组织BCAS2基因的表达规律,并运用蛋白质印迹法(Western blot,WB)、免疫组织化学检测技术(Immunohistochemistry,IHC)对初情期启动前后睾丸组织蛋白进行表达和定位研究。运用亚硫酸氢盐测序法(Bisulfite sequencing PCR,BSP)检测圩公猪睾丸组织中BCAS2基因启动子区CpG岛甲基化水平,筛选出重要的甲基化位点,分析其对BCAS2基因mRNA和蛋白表达水平影响和调控作用。在睾丸组织中,初情期启动后BCAS2基因mRNA的表达量极显著高于初情期启动前(P<0.01);BCAS2蛋白在初情期启动后表达水平高于初情期启动前蛋白表达水平,在间质细胞和精原干细胞中少量表达,而大量表达于次级精母细胞和精细胞。初情期启动前BCAS2基因启动子区甲基化程度高于初情期启动后(P<0.01),且重要甲基化位点甲基化水平与基因表达水平均呈负相关(r=-0.853,P<0.01)。公猪初情期启动过程中,BCAS2基因表达上调,说明该基因参与了圩公猪初情期的启动,推测某些关键甲基化位点抑制了基因的表达,以后可以通过对这些特定的位点去甲基化,来提高初情期启动过程中BCAS2基因的表达水平,从而有助于圩公猪的初情期启动,提高经济效益。
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