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目的:验证民间单方X对炎症性肠病的治疗作用;探究X药物有效部位对葡聚糖硫酸钠诱导的小鼠溃疡性结肠炎的疗效及可能机制。方法:利用葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium,DSS)诱导法建立小鼠溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)模型。借助UC小鼠模型筛选X药物的有效部位,54只C57BL/6小鼠适应性喂养一周后,随机分为正常对照组(Control-S)、模型组(DSS-S)(质量分数2.5%DSS)、5-氨基水杨酸(5-Aminosalicylic acid,5-ASA)阳性药物组(5-ASA-S)、原药组、水煎组、甲醇组、氯仿组、乙酸乙酯组和水提物组,每组6只;根据小鼠体重变化、疾病活动指数(disease activity index,DAI)评分、病理及炎性因子变化,综合评价X药物不同部位对UC小鼠的疗效,初步明确有效部位。进一步分析治疗效果最好的有效部位氯仿萃取物(chloroform extract,CE)的量效关系及可能机制。48只C57BL/6小鼠适应性喂养一周后,随机分为正常对照(Control)、模型组(DSS))(质量分数2.5%DSS)、阳性药物组(5-ASA,75 mg/kg+DSS)、CE低剂量组(30 mg/kg+DSS)、CE中剂量组(60 mg/kg+DSS)和CE高剂量组(90 mg/kg+DSS),每组8只,以灌胃方式给药,连续给药8天。大体观察包括监测小鼠活动和排便情况,并定时称量体重,用于计算DAI评分。终止给药后,测量结肠长度并称量脾脏重量;HE染色观察小鼠肝、肾组织病理变化;Masson染色检测小鼠的肝纤维化程度;ELISA检测血清中TNF-α、IL-6和IL-1β的水平;比色法检测结肠中髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)的含量。通过RT-q PCR检测小鼠结肠组织中炎性因子(TNF-α,IL-1β和IL-6)、粘蛋白(mucin-1和mucin-2)和凋亡相关基因(Bax和Bcl-2)等的转录水平;利用Western blotting法检测紧密连接相关蛋白(ZO-1,ZO-2,Claudin-1和Occludin)和凋亡相关蛋白(Bax和Bcl-2)的表达水平。采用TUNEL法检测各组小鼠结肠组织中肠上皮细胞凋亡情况;利用GC-MS联用技术对氯仿萃取物进行成分分析。结果:UC小鼠模型筛选结果表明,民间单方X的氯仿萃取部位治疗效果最好。而且,不同浓度(30 mg/kg、60 mg/kg和90 mg/kg)的CE可产生与阳性药物5-ASA(75 mg/kg)相当的治疗效果。CE可明显缓解UC症状,包括抑制体重减轻,延长结肠长度,降低DAI评分,抑制脾肿大,以及减轻结肠组织损伤。同时,类似5-ASA,CE可明显降低血清和结肠组织细胞中TNF-α、IL-1β和IL-6(P<0.01)等促炎因子的蛋白基因水平,减轻炎症细胞浸润,有效地抑制MPO含量。而且,高剂量CE在IL-1β和IL-6转录水平上展示比5-ASA强数倍的抑制能力。通过对小鼠肝、肾的病理组织观察,发现CE对小鼠的肝、肾无损伤;Masson染色结果表明小鼠的肝脏无纤维化现象。进一步的研究发现,CE给药组(60、90 mg/kg)能显著逆转DSS的影响,明显上调紧密连接蛋白ZO-1(p<0.05),ZO-2(p<0.01),Claudin-1(p<0.01),Occludin(p<0.05)的表达以及黏蛋白(mucin-1(p<0.01)和mucin-2(p<0.01))的转录水平,调节能力甚至好于5-ASA。另外,TUNEL分析结果提示,CE可以抵抗DSS诱导的细胞凋亡。而且在转录水平和翻译水平上,CE可使促凋亡因子Bax明显下调,抗凋亡因子Bcl-2明显上调,尤其是中、高剂量组的效果好于5-ASA。CE被初步分离鉴定到19个已知化合物,其中胡薄荷酮(Pulegone)、羽扇豆醇(Lupeol)、十七烷(Heptadecane)已被报道有抗炎作用。结论:X对DSS诱导的小鼠UC有明显的治疗效果,CE有效部位的疗效最佳;胡薄荷酮、羽扇豆醇、十七烷、5-羟甲基糠醛、2,4-二叔丁基苯酚和4-乙烯基-2-甲氧基-苯酚等是抗炎活性的重要成分;CE的疗效与减轻肠道炎症、抑制肠上皮细胞凋亡以及维持肠粘膜屏障的完整性和密切相关。