【摘 要】
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目的:探讨木犀草素对脉络膜黑色素瘤细胞C918和OCM-1体外增殖、凋亡、粘附、迁移和侵袭的影响,并初步研究其相关机制。方法:通过CCK-8实验确定本研究中木犀草素作用于C918细胞和OCM-1细胞的时间及浓度。平板克隆实验和Ed U细胞增殖实验检测细胞增殖能力。细胞凋亡Hoechst染色及AnnexinⅤ-FITC/PI双染法流式细胞术检测细胞凋亡情况。Matrigel细胞粘附实验、划痕实验和T
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目的:探讨木犀草素对脉络膜黑色素瘤细胞C918和OCM-1体外增殖、凋亡、粘附、迁移和侵袭的影响,并初步研究其相关机制。方法:通过CCK-8实验确定本研究中木犀草素作用于C918细胞和OCM-1细胞的时间及浓度。平板克隆实验和Ed U细胞增殖实验检测细胞增殖能力。细胞凋亡Hoechst染色及AnnexinⅤ-FITC/PI双染法流式细胞术检测细胞凋亡情况。Matrigel细胞粘附实验、划痕实验和Transwell细胞迁移实验、Transwell细胞侵袭实验分别检测细胞的粘附能力、迁移能力和侵袭的能力。ELISA检测细胞中MMP-2蛋白分泌变化。Western blot检测p-PI3K P85、Akt、p-Akt蛋白表达情况、检测细胞骨架蛋白Vimentin表达情况。用IGF-1预处理C918细胞和OCM-1细胞后再加木犀草素处理,检测木犀草素抑制细胞克隆形成、粘附、迁移、侵袭的作用和PI3K/Akt信号通路的相关性。结果:CCK-8结果显示,木犀草素处理C918细胞24h、48h时IC50分别为51.46μmol/L和28.56μmol/L;木犀草素作用OCM-1细胞24h、48h的IC50分别为54.17μmol/L、31.39μmol/L。平板克隆实验和Ed U细胞增殖实验结果显示,木犀草素能有效抑制C918细胞和OCM-1细胞增殖和克隆形成,且呈现出剂量依赖性。Hoechst染色及AnnexinⅤ-FITC/PI双染法流式细胞术发现木犀草素也可诱导C918细胞和OCM-1细胞凋亡。Matrigel细胞粘附实验、划痕实验、Transwell细胞迁移实验及Transwell细胞侵袭实验结果显示,木犀草素可有效抑制C918细胞和OCM-1细胞粘附、迁移、侵袭,且随着药物剂量的增加抑制作用越显著。ELISA实验显示木犀草素可抑制C918细胞和OCM-1细胞MMP-2分泌。Western blot实验结果显示,木犀草素浓度为15μmol/L时,C918细胞和OCM-1细胞内Vimentin表达不受影响,木犀草素浓度为20μmol/L时可减少Vimentin的表达。Western blot实验结果还显示,木犀草素可减少C918细胞和OCM-1细胞内p-PI3K P85、p-Akt蛋白表达。用IGF-1预处理C918细胞和OCM-1细胞后再加木犀草素处理,克隆形成实验结果显示:C918细胞和OCM-1细胞中15μmol/L木犀草素+IGF-1组细胞克隆形成数与15μmol/L木犀草素组细胞克隆形成数相比,差异无统计学意义（P>0.05）;粘附实验结果显示:OCM-1细胞在IGF-1预处理后木犀草素的粘附抑制作用被减弱,而在C918细胞中,15μmol/L木犀草素+IGF-1组细胞粘附数和15μmol/L木犀草素组细胞粘附数相比,差异无统计学意义（P>0.05）;Transwell细胞迁移实验和Transwell细胞侵袭实验显示,IGF-1预处理C918细胞和OCM-1细胞后木犀草素对其迁移抑制作用被减弱、侵袭抑制作用被减弱。结论:木犀草素能抑制C918细胞和OCM-1细胞增殖、粘附、迁移、侵袭,诱导C918细胞和OCM-1细胞凋亡。木犀草素可抑制C918细胞和OCM-1细胞的MMP-2分泌,抑制细胞骨架蛋白Vimentin的表达。木犀草素抑制C918细胞的迁移和侵袭、OCM-1细胞的迁移和侵袭和粘附均与PI3K/Akt信号通路的抑制有关;木犀草素抑制C918细胞粘附和克隆形成、OCM-1细胞克隆形成可能主要是通过细胞内其他信号通路发挥作用的。
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