论文部分内容阅读
目的:研究1,25-二羟维生素D3[1,25-（OH）2D3]通过转化生长因子-β1（TGF-β1）/（Smad2/3）通路对活性氧（ROS）的影响,从而调节哮喘小鼠气道重塑的相关机制,为临床应用1,25-（OH）2D3治疗哮喘提供理论依据。方法:本实验选取健康雌性Balb/c小鼠24只,随机将小鼠分为3组,每组8只,分别将其标记为正常对照组（A组）、哮喘模型组（B组）、1,25-（OH）2D3+哮喘模型组（C组）。B组和C组用卵清蛋白（OVA）+氢氧化铝混悬液0.5 mL于第0,7,14天进行腹腔注射致敏,而A组则给予等体积生理盐水进行腹腔注射。于实验第21天开始进行哮喘激发,B组和C组用2.5%卵清蛋白（OVA）于第21-27天每天雾化1次,第28-77天隔天雾化1次以构建小鼠慢性哮喘模型,同时A组小鼠于实验第21天开始给予等量生理盐水进行雾化吸入。在进行哮喘激发同时,C组小鼠在每次雾化激发前半小时予以腹腔注射100ng 1,25-（OH）2D3,整个实验过程持续77天。末次激发后24小时内用戊巴比妥麻醉并处死小鼠。取出部分右肺组织常规制备病理石蜡切片,用于HE、PAS染色及Masson染色,余肺组织用于冰冻切片免疫荧光检测小鼠气道ROS水平。将病理切片置于光镜下观察并分析各组小鼠的气道炎症、气道黏液高分泌及气道重塑情况。运用计算机图像分析系统测定支气管基底膜周径（Pbm）,气管内管壁面积（WAi）,平滑肌层面积（WAm）,评价各组小鼠气道重塑情况。同时取小鼠左肺组织用Western blot方法检测TGF-β1、Smad2/3的表达水平。结果:1.小鼠一般情况:A组小鼠精神、食欲可,体重增加,无喘息、烦躁、呼吸困难等症状。B组小鼠精神、食欲欠佳,体重增加不明显,出现喘息、烦躁、呼吸困难、呼吸频率增快、大小便失禁、唇黏膜紫绀等表现,而C组小鼠精神、食欲一般,体重下降较明显,出现喘息、烦躁、呼吸困难、唇黏膜紫绀等表现,但较B组有所减轻。2.与A组小鼠比较:⑴B、C组小鼠均可见气道周围大量炎症细胞浸润,黏液分泌增加,支气管壁及平滑肌层厚度明显增加,上皮下胶原沉积明显增多,差异具有统计学意义（P<0.01）;⑵B组、C组小鼠肺组织中TGF-β1、Smad2/3蛋白及ROS的表达均增加,差异具有统计学意义（P<0.01）。3.与B组小鼠比较:⑴C组小鼠气道周围炎症细胞浸润及黏液分泌减少,支气管壁及平滑肌层厚度减小,上皮下胶原沉积减少,差异具有统计学意义（P<0.01）;⑵C组小鼠肺组织中TGF-β1、Smad2/3蛋白及ROS的表达明显减少（P<0.01）,差异具有统计学意义。结论:⑴卵清蛋白联合氢氧化铝佐剂致敏激发小鼠可构建哮喘气道重塑模型。⑵1,25-（OH）2D3可以在一定程度上抑制哮喘小鼠气道炎症及气道重塑,其机制可能是通过抑制TGF-β1/Smad2/3通路,从而减少ROS的表达,达到调节哮喘小鼠气道重塑。