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目的：观察VEGF-C和RAF-1基因共沉默对人肺癌细胞A549增殖、侵袭、细胞周期等的影响，并初步探讨其机制。方法：构建靶向VEGF-C和RAF-1基因的shRNA，酶切鉴定、测序正确后，转染A549细胞，分别采用RT-PCR和Western blot方法检测mRNA和蛋白表达，选择有效干扰序列，并筛选出稳定表达shRNA的细胞系。将VEGF-C和RAF-1构建到同一个质粒载体，筛选出稳定表达双shRNA的细胞系，并观察其抑制效果。MTT法检测细胞增殖能力，Boyden小室检测细胞侵袭能力，流式细胞仪(FCM)检测蛋白表达、细胞周期及细胞凋亡水平。Western blot方法检测相关信号通路Caspase3及PDK1、AKT、RAF和ERK磷酸化水平情况。结果：成功构建靶向VEGF-C和RAF-1基因的有效shRNA，并筛选出稳定转染细胞系A549-VEGF-Ce和A549-RAF-1e，检测mRNA和蛋白表达明显受到抑制。成功构建联合表达VEGF-C和RAF-1基因的有效shRNA表达载体，并筛选出稳定转染细胞系A549-RAF-1-VEGF-Ce，检测mRNA和蛋白表达与单独VEGF-C和RAF-1shRNA作用一致。MTT法检测结果表明A549-Raf-1-VEGF-Ce与A549-Raf-le以及A549-VEGF-Ce的增殖能力与对照组细胞A549相比明显降低。A549-Raf-le增殖的平均值较A549-VEGF-Ce略低，但无统计学差异。A549-Raf-1-VEGF-Ce的增殖能力与A549-VEGF-Ce相比显著下降。体外趋化侵袭实验显示，A549-Raf-le组、A549-VEGF-Ce组以及A549-Raf-1-VEGF-Ce组的侵袭细胞数比A549组和各无效shRNA组侵袭细胞数减少，各实验组之间差异无显著性。检测细胞周期分布发现，A549-VEGF-Ce细胞其G1期细胞比例高于其他各组细胞，而A549-Raf-le组细胞出现了凋亡峰。A549-Raf-1-VEGF-Ce组细胞G1期的细胞与A549-VEGF-Ce组相比减少的，其凋亡明显增高。进一步检测各实验组细胞的凋亡水平，A549-Raf-1-VEGF-Ce细胞的凋亡率(24％)高于A549-Raf-le细胞的凋亡率(17％)，其他各组细胞凋亡率无明显变化，与细胞周期分析结果相一致。Western blot结果显示在A549-Raf-1-VEGF-Ce和A549-Raf-le中能检测到活化的Caspase3大亚基片段，各组细胞中AKT、PDK1、RAF的磷酸化水平无明显变化，A549-Raf-1-VEGF-Ce细胞ERK的磷酸化水平有较明显的下降。结论：稳定转染靶向VEGF-C和RAF-1基因的shRNA能够抑制A549细胞的增殖与体外侵袭能力，并调控细胞周期分布及细胞凋亡。同时干扰RAF-1和VEGF-C有一定的协同效应，与Caspase3途径及ERK的磷酸化水平增高有关。