论文部分内容阅读
氨基酸和DNA是生物体内的两种非常重要的物质,他们在生命活动中发挥着重要作用,其中氨基酸是组成蛋白质的基本单元,而DNA则是遗传信息的携带者。对于它们的分析是进行生命领域相关研究的基础。本论文分两部分分别对氨基酸和甲基化DNA进行了分析。 氨基酸的手性分离是分析化学研究领域内重要的研究方向之一,对其进行快速的分离和定量是其中重要的研究部分。毛细管电色谱技术,它兼具了毛细管电泳和高效液相色谱的双重优点,是手性拆分领域的常用方法。在毛细管电色谱技术中,固定相的选择对于分离的效果至关重要。 本论文的第二章制备了一种有机-无机介孔材料键合的开管柱,并对其在手性拆分方面的色谱性能进行了评价。固定相通过一锅法合成,之后进行了氨基化修饰。将毛细管内壁进行环氧烷的修饰,之后通过共价键将介孔材料修饰到毛细管内壁上。所制备的有机-无机介孔材料通过FT-IR、BET和SEM等手段进行了表征。通过对手性氨基酸对映体的分离对其色谱性能进行了评价,优化了缓冲液pH、浓度对分离效果的影响。并通过重复性实验对毛细管柱的稳定性进行了评价,针与针之间峰面积和迁移时间的RSD值小于2.3%,日间RSD值小于4.0%,柱间RSD值小于5.0%。 DNA的甲基化是在原核生物和真核生物中广泛存在的一种表观遗传现象。5-甲基胞嘧啶(5mC)和N6-甲基腺嘌呤(6mA)分别是真核生物和原核生物中分布最为广泛的两种修饰。近些年来,有大量的研究关注到了5mC和其去甲基化中间产物5-羟甲基话胞嘧啶(5hmC)在生物学中的重要功能以及其作为表观遗传的重要标志。N6-甲基腺嘌呤则是广泛存在于原核生物中的一种DNA修饰,在原核生物的DNA修饰中占据着主导地位,且该修饰有着重要的生理意义。6mA在细菌的许多生理过程中发挥重要的作用。对于甲基化DNA的分离分析方法的研究,则是研究其生物功能的基础。 本论文第三章建立了一种快速分离羟甲基胞嘧啶的毛细管胶束电动色谱体系。该体系采用SDS作为添加剂即作为假固定相对C、5mC、5hmC进行了分离,并对分离时的pH值、缓冲液浓度、SDS浓度等进行了优化。在优化后的条件下三种分析物可在8min内达到完全分离。之后采用该方法分析比较了野生型和TET1-CD过表达的细胞内5hmC的水平,结果显示过表达的细胞的5hmC水平明显升高。回收率实验显示三种物质的回收率在99.2%-102.5%之间,RSD值在2.7%-4.1%之间。 本论文笫四章建立了一种富集6mA的方法。首先,通过基因工程构建了YTHDF2蛋白的质粒,并将质粒转化入大肠杆菌内进行表达。之后对表达的蛋白进行纯化,并优化纯化过程。然后采用含有6mA并具有荧光标记的探针检验蛋白的活性,结果显示蛋白可与含6mA的DNA探针特异性结合。该蛋白有望应用于6mA的富集中。