氨基酸及甲基化DNA分析方法的研究

来源 :中国科学院大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yu8886882
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
氨基酸和DNA是生物体内的两种非常重要的物质,他们在生命活动中发挥着重要作用,其中氨基酸是组成蛋白质的基本单元,而DNA则是遗传信息的携带者。对于它们的分析是进行生命领域相关研究的基础。本论文分两部分分别对氨基酸和甲基化DNA进行了分析。  氨基酸的手性分离是分析化学研究领域内重要的研究方向之一,对其进行快速的分离和定量是其中重要的研究部分。毛细管电色谱技术,它兼具了毛细管电泳和高效液相色谱的双重优点,是手性拆分领域的常用方法。在毛细管电色谱技术中,固定相的选择对于分离的效果至关重要。  本论文的第二章制备了一种有机-无机介孔材料键合的开管柱,并对其在手性拆分方面的色谱性能进行了评价。固定相通过一锅法合成,之后进行了氨基化修饰。将毛细管内壁进行环氧烷的修饰,之后通过共价键将介孔材料修饰到毛细管内壁上。所制备的有机-无机介孔材料通过FT-IR、BET和SEM等手段进行了表征。通过对手性氨基酸对映体的分离对其色谱性能进行了评价,优化了缓冲液pH、浓度对分离效果的影响。并通过重复性实验对毛细管柱的稳定性进行了评价,针与针之间峰面积和迁移时间的RSD值小于2.3%,日间RSD值小于4.0%,柱间RSD值小于5.0%。  DNA的甲基化是在原核生物和真核生物中广泛存在的一种表观遗传现象。5-甲基胞嘧啶(5mC)和N6-甲基腺嘌呤(6mA)分别是真核生物和原核生物中分布最为广泛的两种修饰。近些年来,有大量的研究关注到了5mC和其去甲基化中间产物5-羟甲基话胞嘧啶(5hmC)在生物学中的重要功能以及其作为表观遗传的重要标志。N6-甲基腺嘌呤则是广泛存在于原核生物中的一种DNA修饰,在原核生物的DNA修饰中占据着主导地位,且该修饰有着重要的生理意义。6mA在细菌的许多生理过程中发挥重要的作用。对于甲基化DNA的分离分析方法的研究,则是研究其生物功能的基础。  本论文第三章建立了一种快速分离羟甲基胞嘧啶的毛细管胶束电动色谱体系。该体系采用SDS作为添加剂即作为假固定相对C、5mC、5hmC进行了分离,并对分离时的pH值、缓冲液浓度、SDS浓度等进行了优化。在优化后的条件下三种分析物可在8min内达到完全分离。之后采用该方法分析比较了野生型和TET1-CD过表达的细胞内5hmC的水平,结果显示过表达的细胞的5hmC水平明显升高。回收率实验显示三种物质的回收率在99.2%-102.5%之间,RSD值在2.7%-4.1%之间。  本论文笫四章建立了一种富集6mA的方法。首先,通过基因工程构建了YTHDF2蛋白的质粒,并将质粒转化入大肠杆菌内进行表达。之后对表达的蛋白进行纯化,并优化纯化过程。然后采用含有6mA并具有荧光标记的探针检验蛋白的活性,结果显示蛋白可与含6mA的DNA探针特异性结合。该蛋白有望应用于6mA的富集中。
其他文献
该文重点对生物可降解材料的研究现状以及在生物活性物质的控制释放和基因转染系统中的应用发展进行了综述.生物降解型聚酯具有优异的生物降解性和生物相容性,在生物医用材料
多核d金属聚合物不仅展现出新颖的结构模式,同时还以优异的荧光性能,引起了众多研究者的广泛重视.采用多功能基团的芳香族配体来合成此类化合物,已成为当前超分子合成研究中
报道采自安徽省万佛山自然保护区的一种寄生在蜘蛛上的虫草标本,经鉴定为莲状虫草Cordycepsnelumboides。经多批次利用子囊孢子分离得到其刺束梗孢无性型Akanthomyces,属首次
四元碳环的构建是有机化学合成中的难点。而烯烃的[2+2]环加成反应是构建四元碳环最直接的途径。研究烯烃的[2+2]环加成反应的机理有助于在实验中更好地设计构建四元碳环的体
稀土硼酸盐化合物种类丰富,可以作为激光晶体、非线性光学晶体、自倍频晶体、荧光材料、闪烁等材料,在光学方面有着广泛的应用。因此,探索和研究新型稀土硼酸盐具有十分重要的实
碳材料以其特殊的电子、独特的结构以及丰富的表面化学等性质被广泛应用于电化学和电分析化学。石墨炔是由人工合成得到的一种由sp-和sp2-杂化态的成键方式构成的新型碳的同
随着互联网的发展,漫画已经不再局限于书本的形式了。在网络中,它可以通过图片、动图、表情等形式深入到我们的生活当中,对我们生活的影响力也越来越大。在漫画的创作过程当
本文介绍了相变储热材料的研究状况,阐述了测定热导率的原理以及常见的测定热导率的几种方法。详细介绍了用热敏电阻测量热导率的装置和原理,这是一种瞬时相对法。此方法测试精
本文研究了商业插画在食品包装设计的应用,以及商业插画的形式对提升食品包装的现实意义。其中从食品包装运用插画形式表达更明确清晰,插画表现形式的多样性,插画形式的食品
新型薄膜太阳能电池,包括染料/量子点敏化太阳能电池和钙钛矿太阳能电池(PSCs),以其潜在的低成本,简单的制备工艺和相对较高的光电转换效率(PCE)等优势赢得了科研工作者的广泛关