聚球藻中活性化合物的分离及抗菌、抗氧化活性研究

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天然产物始终是新药的源泉,海洋微藻作为初级生产者和海洋生物的主体,在海洋生态系统的物质和能量循环中起着重要作用,而其独特的生存环境,为微藻产生功能独特的代谢物提供了温床。随着微藻中具有生物活性的物质越来越多的被发现,微藻活性物质的成为研究热点。因此,海洋微藻将成为新药开发的巨大潜在资源。聚球藻(Synechococcus)属于蓝藻门(Cyanobacteria)的一种微藻,在其生长期间能够合成大量功能性的次级代谢产物,本文以聚球藻(Synechococcus sp.)作为实验材料乙醇抽提获得浸膏,其后分别采用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取获得不同极性的萃取物,并对三种溶剂萃取物进行成分和活性追踪研究,根据研究结果进一步对活性较好的组分进行分离纯化,获得两种单体化合物,并进一步鉴定了化合物分子结构。主要实验结果如下:(1)对冷冻干燥后的聚球藻藻粉成分进行分析,结果显示聚球藻中含灰分18.4%,粗蛋白12.3%,粗脂肪16.2%,粗纤维5.9%,水分和碳水化合物分别为35.7%和11.5%。聚球藻中脂肪含量在微藻中相对较高,具有较大的潜在开发利用价值。(2)冷冻干燥后的聚球藻藻粉分别用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇三种极性不同的溶剂提取,结果显示聚球藻中低极性组分物质含量较多,中极性组分含量最少。同时对各相粗提物进行GC-MS联用分析后发现,石油醚相和正丁醇相中各含20种成分。石油醚相包括酯类、酸类、醇类和碳烯类,其中酸类物质含量最多,占69.9%;其余含量依次为酯类,碳烯类,醇类。正丁醇相中包括酸类、烷烃类、酯类、酮类和醇类,其中酯类含量高达40.5%,其余含量依次为醇类,酸类,烷烃类,和酮类。(3)对三相粗提物进行抗菌抗氧化活性检测,确定活性组分,便于进一步分离。粗品中石油醚相的抗菌能力优于乙酸乙酯和正丁醇相,其DPPH自由基清除率的IC50值为235.59μg/mL,小于乙酸乙酯相的286.20μg/mL和正丁醇相的321.77μg/mL,说明石油醚相的抗氧化能力较强,因此,对石油醚相进行后续进一步分离。(4)石油醚相进一步分离得到G1、G2和G3三个组分,DPPH自由基清除活性追踪显示,G3组分活性较弱,G1和G2组分的半数清除率浓度IC50分别为292.76μg/mL和346.76μg/mL。因此对G1和G2组分继续纯化,从G1中得到H1和H2两个组分,从G2中得到N1、N2和N3三个组分。活性分析结果进一步发现H1和N1的清除效果较好,其IC50值分别为302.82μg/mL和346.85μg/mL,其它几个组分活性较弱。(5)采用凝胶Sephadex LH-20柱层析色谱进一步对H1和N1两个组分进行分离纯化,最终得到两个单体化合物S1和S2。经核磁共振谱鉴定确定S1为β-谷甾醇,S2为胡萝卜苷。(6)对β-谷甾醇和胡萝卜苷两种单体化合物的抗菌活性和抗氧化活性进行检测。抗菌活性结果显示β-谷甾醇对革兰氏阳性菌和阴性菌均有一定的抑制作用,其中对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的最小抑菌浓度分别为7.5mg/ml和3.7mg/ml;而胡萝卜苷基本没有抑菌活性;对β-谷甾醇和胡萝卜苷两种化合物进行抗氧化活性研究结果显示,两种化合物均有一定的抗氧化能力,其DPPH自由基清除率的IC50值分别为372.62μg/mL和334.37μg/mL,且随浓度的增加,抗氧化能力增强,在同一样品浓度下胡萝卜苷的抗氧化能力要强于β-谷甾醇。
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