论文部分内容阅读
目的 研究乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)DNA在HBsAg、HBeAg阳性患者睾丸和附睾组织中的检出及组织细胞定位,观察体外培养的鼠精子细胞俘获HBV DNA的能力及HBV DNA在精细胞中的定位,采用精子载体法建立HBV DNA垂直传递的小鼠模型,探讨HBV垂直传播的机制。 方法 ①取22例HBsAg、HBeAg阳性患者的睾丸和附睾组织,以18例HBsAg、HBeAg阴性者睾丸和附睾组织作为阴性对照,应用巢式聚合酶链反应(nest-PCR)技术和荧光原位杂交(FISH)技术检测并定位睾丸和附睾组织中的HBV DNA;②体外培养小鼠及大鼠精细胞,阳离子转染剂介导HBV DNA转染精细胞。应用聚合酶链反应(PCR)技术检测鼠精细胞中HBV DNA的存在;制作精子涂片,FISH观察HBV DNA在精细胞中的定位;③采用精子载体法建立HBV DNA垂直传递小鼠模型,应用PCR技术和半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测HBV DNA在新生代小鼠中的表达情况。 结果 ①22例乙肝患者睾丸和附睾组织中,18例组织检出HBV DNA,阳性率为81.8%,对照组未检测到HBV DNA,两组差别有高度统计学意义(P<0.001);荧光原位杂交检测到HBV DNA主要集中在大部分乙肝患者睾丸组织生精小管的生精上皮和基底部;②鼠精细胞原位杂交结果显示,荧光显微镜下精子样本中部分精子带有黄绿色阳性杂交信号,普通光镜下DAB显色部分精子带有黄褐色阳性杂交信号,主要在精子头部的中后部区域两侧和顶部,对照组无信号存在或只呈现本底水平染色。在高倍镜下,随机选取视野,统计携带HBV DNA的精子数目,荧光原位杂交显示阳性率为28.2%(P<0.001),DAB显色后显示阳性率为31%(P<0.001);③应用精子载体法获得31只新生代小鼠:11只小鼠检出HBV DNA,检出率为35.4%(11/31),其中又有3只检出HBV RNA。 结论 ①乙肝患者睾丸和附睾组织中存在HBV DNA,定位于各级生精细胞内,为HBV的垂直传播提供了形态学依据;②精子对HBV DNA具有主动俘获性,可以携带HBV DNA;③应用精子载体法建立HBV DNA经精细胞垂直传递的小鼠模型,说明HBV DNA可经精细胞传递给下一代新生小鼠,并在新生代小鼠中表达复制。