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银杏(Ginkgo biloba L.)是银杏属多年生乔木,其观赏价值较高,常作为景观树种应用于街道遮荫或园林造景,且还有较高的食用价值和医药价值。因银杏叶片中的含银杏黄酮具有重要的药用价值,目前市场对优质叶片需求量大。为给银杏黄酮生产提供一条适宜工业化而非原始低效率采集的方法,本试验以银杏为材料利用发根农杆菌进行遗传转化体系建立,试图提高银杏黄酮的产出率,并为之后的银杏毛状根工业化生产提供技术支持,本研究结论如下:1)通过单因素试验筛选并优化遗传转化的操作步骤,提高了毛状根诱导率。本试验发现外植体正在预培养3d处理下的死亡率显著低于0d,1d和2d;菌种R1601的毛状根诱导率显著高于A4,ATCC15834和LBA9402,增幅分别为153%,121%及144%;White培养基中的外植体死亡率显著低于1/2MS培养基,降幅为10%,而毛状根诱导率显著高于1/2MS培养基,与1/2MS中毛状根诱导率相比上调364%;侵染30min处理的外植体毛状根诱导率显著高于15min及25min,增幅分别为68%和79%。通过以上的单因素试验发现适合诱导银杏毛状根的操作是:银杏无菌叶片预培养三天后,在R1601农杆菌中侵染30min并吸干菌液,移入White培养基进行共培养及除菌培养。经优化后的遗传转化体系操作,可将毛状根诱导率提高至未优化前的2倍。2)1.0mg/L IBA处理中的毛状根伸长量显著高于0.1 mg/L IBA和无激素对照,增幅分别为429%及363%,但继代后期银杏叶片切口边缘及毛状根会产生愈伤;0.5mg/L IBA处理下毛状根伸长量显著高于0.1 mg/L IBA和对照,增幅分别为357%和300%,且在继代30d内未出现愈伤化,叶片及毛状根褐化程度小,最终确定0.5 mg/L IBA为最适宜毛状根继代的浓度。在毛状根继代25d至35d期间,部分毛状根根部开始由乳白变成黄色,继代35d时的PAL、C4H、4CL和POD基因表达量均显著低于25d的表达量,降幅分别为32%,56%,50%及48%;在毛状根继代35d至45d期间,大部分毛状根由白转黄,褐化情况加重,PAL与C4H基因表达量显著低于35d的表达量,降幅分别为81%及25%,而POD表达量较35d反而上调了5%。毛状根在继代35d时的多酚含量显著高于继代45d,与45d的总酚含量相比高了19.6%。3)毛状根PAL、4CL和C4H基因表达量均显著高于组培苗,增幅分别为185%,576%及72%,且组培苗PAL、4CL和C4H基因表达量也都显著高于实生苗,增幅分别为712%,633%及1038%;组培苗叶片中CHS、CHI、F3H及FLS基因表达量均显著高于毛状根,增幅分别为186%,233%,96%及60%,毛状根中CHS、CHI及F3H基因表达量也都显著高于实生苗,增幅分别为106%,881%及440%。但实生苗叶片中的FLS基因表达量却显著高于毛状根,较之上调了71%;实生苗的总黄酮醇苷含量显著高于组培苗与毛状根,增幅分别为155%和486%,且组培苗的含量也显著高于毛状根,组培苗比毛状根含量高出130%。