【摘 要】
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目的：建立豚鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)的体外培养体系,体外脂质体2000介导神经营养因子-3(NT-3)转染BMSCs,为内耳移植提供前期研究基础。方法：(1)采用全骨髓贴壁法培养豚鼠BMS
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目的：建立豚鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)的体外培养体系,体外脂质体2000介导神经营养因子-3(NT-3)转染BMSCs,为内耳移植提供前期研究基础。方法：(1)采用全骨髓贴壁法培养豚鼠BMSCs,传代培养,取P3代BMSCs做生长曲线图,在流式细胞仪上检测BMSCs的表面标志物CD29,CD90以及造血细胞表面标志物CD45。(2)按照不同质粒-脂质体配比介导pEGFP-N1-NT3转染P3代BMSCs,转染后48h后计算转染效率,选择最佳质粒-脂质体配比。(3)按照最佳质粒-脂质体配比将pEGFP-N1-NT3质粒转染P3代BMSCs,转染后1d,3d,7d,14d,观察其荧光表达情况。(4)转染后48h的BMSCs提取蛋白,采用Western Blot来验证NT-3蛋白表达。结果：(1)全骨髓贴壁法获得细胞数量多,增殖快,通过传代可以纯化细胞。(2)生长曲线呈S型,基本符合Logistic生长曲线。(3)流式细胞仪检测细胞CD29和CD90阳性表达,CD45阴性表达,符合BMSCs特征。(4)不同质粒-脂质体配比中,质粒：脂质体为4μg：12μl时转染率最高,是最佳质粒-脂质体配比。(5)转染后48小时荧光表达较强,7d可见荧光表达,但较前明显减弱,到14d基本未见明显荧光表达。(6)Western Blot验证NT-3基因成功表达。结论：(1)全骨髓贴壁法可以成功培养出增殖快,细胞纯度高的BMSCs。(2)脂质体法成功介导NT-3真核质粒在BMSCs内表达,BMSCs可能作为内耳基因治疗的理想载体。
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