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狂犬病是由狂犬病病毒（Rabies virus,RABV）损害宿主中枢神经系统（CNS）而引起的一种致命性人兽共患病。目前防治此病的最有效措施仍然是疫苗免疫,狂犬病疫苗诱导的体液免疫应答水平是评价免疫保护能力的关键性指标。TLR4分子表达于多种免疫细胞表面,在模式分子识别、信号通路激活、细胞因子释放和体液免疫应答等过程中起到重要作用。TLR4不仅识别细菌脂多糖（LPS）和多种病毒的结构蛋白,而且能够响应种类繁多的内源性预警分子（DAMPs）。常规树突状细胞（c DCs）是启动体液免疫应答的关键性抗原提呈细胞（APCs）,还没有研究报道c DCs亚群c DC1（CD8α+CD11b-）和c DC2（CD8α-CD11b+）的TLR4通路如何参与狂犬病疫苗诱导的免疫应答。本课题通过比较TLR4-/-型和野生型（WT）小鼠的免疫应答,研究了TLR4分子影响狂犬病疫苗诱导的体液免疫应答的多个指标,具体包括病毒中和抗体（VNA）水平、总Ig G滴度、免疫保护效果、c DCs成熟、c DC1/c DC2招募、辅助性滤泡T细胞（Tfh）分化、I型/II型辅助性T细胞（Th1/Th2）分化、生发中心B细胞（GC B）增殖和浆细胞（PCs）生成等,以下是主要的研究成果:1. TLR4促进狂犬病弱毒活疫苗诱导的体液免疫应答狂犬病活病毒疫苗诱导小鼠产生T细胞依赖性免疫应答,抗原呈递细胞（APCs）桥连了天然免疫和适应性免疫。TLR4分子虽然不影响活病毒疫苗诱导APCs（包括BMDCs、B细胞和c DCs）发育成熟,但是显著影响VNA水平和免疫保护力。狂犬病活病毒疫苗诱导小鼠二级淋巴器官（SLOs）中c DC2显著增加,导致c DC1比例显著减少,表明c DC2是处理RABV抗原并且向初始T细胞（Tn）呈递抗原肽复合物（p MHC-II）的主要APC。RABV感染诱导携带p MHC-II的c DC2发生TLR4依赖性的迁移过程,迁移进入SLOs的c DC2激活Tn细胞,导致Tfh和Th1细胞分化。c DC2依赖的Tfh分化促进GCs形成和GC B细胞增殖,诱导分泌抗体的PCs生成,生成更多的VNA和总Ig G。因此,TLR4依赖性c DC2迁移招募促进狂犬病弱毒活疫苗诱导的体液免疫应答,提高了小鼠抵抗RABV强毒感染的能力。然而,RABV感染诱导细胞释放的多种内源性TLR4配体（如HSP70、HS和HMGB1等）引导c DC2由外周组织向SLOs迁移的分子机制有待下一步研究。此外,我们还发现TLR4分子促进Th1型免疫反应（高亲和力抗体Ig G2a）,抑制Th2型免疫反应（低亲和力抗体Ig G1）,维持Th1/Th2稳态平衡。2. TLR4激动剂增强狂犬病灭活疫苗诱导的体液免疫应答狂犬病灭活疫苗诱导的免疫反应显著弱于活病毒疫苗,原因在于狂犬病灭活疫苗不能诱导c DCs成熟、c DC2招募、Tfh分化以及Th1/Th2分化。TLR4特异性激动剂MPLA通过TLR4途径促进c DCs成熟、c DC2招募、Tfh分化、GC B增殖和PCs生成,提高VNA水平以及RABV特异性Ig G、Ig G2a和Ig G2b产量,诱导较强的Th1型免疫反应。MPLA添加使灭活疫苗能够模拟活病毒疫苗诱导的应答反应,提高灭活疫苗的免疫效率和小鼠免疫保护力。