研究目的 1、首先模拟Langendorff的心脏体外灌流装置，建立人离体骨肉瘤组织血管及正常组织的噬菌体随机肽库筛选模型，并对该模型进行简要评价； 2、利用噬菌体呈现技术从噬菌体随机短肽库中亲和筛选人离体骨肉瘤组织血管，以期得到与人骨肉瘤组织血管高特异性结合的短肽，为骨肉瘤靶向化疗的进一步研究提供依据。 研究方法 1、首先建立人离体骨肉瘤组织血管及正常组织的噬菌体随机肽库筛选模型，利用类似Langendorff的体外灌流装置，灌流液采用改良的Krebs-Henselent溶液，通过血管途径，对灌流模型的各项指标(包括温度、PH值、灌流液氧分压等)随灌流时间的变化情况进行监测，实现对该模型的简要评价； 2、在人骨肉瘤组织血管及正常组织模型上，运用噬菌体表面呈现技术对噬菌体随机短肽库进行差减生物淘筛，经过四轮的亲和、洗脱、扩增等噬菌体肽库筛选过程，在第二、第三、第四轮亲和筛选后滴定板上分别随机抽取部分阳性克隆进行DNA序列测定，利用DNAman分析软件推导出相应噬菌体呈现肽的氨基酸序列，并通过序列分析比较得出相对保守的短肽序列，即为与人骨肉瘤组织血管高特异性结合的短肽。 3、再将含有保守序列的阳性克隆通过组织化学染色方法进行鉴定，观察经生物淘筛得到的阳性噬菌体-肽与骨肉瘤组织血管、与乳腺癌组织血管及与正常组织血管的亲和性。 研究结果 1、结合人骨肉瘤组织血管的特点，首先利用类似Langendorff的灌流装置，成功建立人离体骨肉瘤组织血管及正常组织的噬菌体肽库筛选模型，并经初步鉴定此模型的稳定性及实用性，为进一步的噬菌体肽库筛选打下良好基础； 2、建模成功后，对人离体骨肉瘤组织血管进行噬菌体随机肽库筛选，并在筛选过程中运用差减筛选的方法，经过四轮亲和、洗脱、扩增等噬菌体肽库筛选过程，分别在第二、三、四轮筛选后滴定板上随机挑取部分阳性克隆进行DNA序列测定，经过DNAInan分析软件椎导出相应的氨基酸序列，并经分析比较得出具有相对保守性的短肽序列为RLTR； 3、将含有保守序列的噬菌体－肽进行组织化学染色方法鉴定，结果显示这些噬菌体－肽均与人骨肉瘤血管具有良好结合特性，而与正常组织及乳腺癌组织无明显结合。 结论 亚、建立人离体骨肉瘤组织血管及正常组织的噬茵体肽库筛选模型是可行的，并具有较好的实用性： 2、经过四轮肽库筛选、分析并经鉴定得出：RLTR为人骨肉瘤组织血管特异性很强的亲和肽。从而为骨肉瘤靶向化疗的进一步研究提供有益帮助。