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共轭亚油酸(CLA)有很好的抗癌、减肥、抗动脉硬化等生理活性。目前,CLA工业化生产主要由化学异构法制得,其中产物异构体组成复杂,不利于在食品和医药方面使用。借助食品级微生物的亚油酸(LA)异构化,生物合成CLA可以获得异构体组成单一的产物,提高了产品中CLA的生物活性,拓宽了强化CLA食品的应用前景。本文采用具有转化LA到CLA能力的嗜酸乳杆菌菌株(Lactobacillus acidophilusNCFM和Lactobacillus acidophilus Lakcid)来合成CLA,在建立CLA气相色谱程序升温检测方法的基础上,对高产CLA菌种的诱变选育、菌株代谢LA生成CLA的条件,亚油酸异构酶分离纯化和酶学性质、强化CLA的功能乳制品等进行了研究,旨在借助嗜酸乳杆菌异构化亚油酸生成CIA来提高乳品的功能性。 1、利用气相色谱和紫外光谱方法,建立共轭亚油酸(CLA)通用检测和定量分析程序为。证实,对于大多数脂肪酸而言,气相色谱法是比较好的CLA检测方法。气相色谱程序升温条件是:进样器温度200℃,炉温在60℃保持5min,然后以20℃/min升温至220℃保持47min:检测器温度为250℃;进样量1μL;延迟时间为7min;分析时间为60min。 2、以L.acidophilus NCFM和L.acidophilus Lakcid为出发菌株,通过紫外照射和NTG诱变处理后,获得两株具有较高转化LA到CLA的突变株L.acidophilusNCFM-mt和L.acidophilus Lakcid-mt。其中,L.acidophilus NCFM-mt的CLA最高产量达到28.67μg/mL,较原来出发菌株CLA产量提高了19.11μg/mL,而L.acidophilusLakcid-mt的CLA最高产量达到41.61μg/mL,较原来出发菌株CLA产量提高了31.4μg/mL。 3、L.acidophilus NCFM-mt和L.acidophilus Lakcid-mt转化LA生成CLA的优化条件是:两菌体发酵生成CLA的最适温度为37℃,pH7.5,发酵时间24h。L.acidophilus Lackid-mt以乳糖为碳源,以鱼蛋白胨为氮源,且二者比例为2:3时,CLA产量达到最高,为43.81μg/mL;L.acidophilus NCFM-mt以蔗糖为碳源,以蛋白胨为氮源,且二者比例为2:1时,CLA产量达到最高,为32.19 μg/mL。 4、研究表明,BSA可以作为最优乳化剂来提高LA的乳化效果。当LA浓度为0.2g/L,菌株接种量为5%(v/v),发酵48h后的发酵液pH降低到3.7。气谱分析结果表明,在这样的发酵条件下,L.acidophilus Lackid-mt转化LA到CLA的转化率为59%,且CLA异构体含量在产物总脂肪酸中的比例达到36%;L.acidophilus NCFM-mt转化LA到CLA的转化率为52%,CLA异构体含量在产物总脂肪酸中的比例达到32%。 5、L.acidophilus NCFM-mt和L.acidophilus Lakcid-mt亚油酸异构酶的相对分子