【摘 要】
：
目的:表达和纯化A组轮状病毒（Rotavirus,RV）VP6蛋白;利用纯化后的RV病毒粒子和VP6蛋白分别免疫动物制备特异性多克隆抗体;基于VP6蛋白建立血清中人A组轮状病毒抗体水平的检测方法。方法:（1）将VP6基因连接到p ET30a载体构建重组质粒,鉴定成功后在大肠杆菌系统中进行蛋白表达,22℃低温诱导表达和纯化可溶VP6蛋白,37℃高温诱导制备包涵体VP6蛋白并进行透析复性;（2）将VP
论文部分内容阅读
目的:表达和纯化A组轮状病毒（Rotavirus,RV）VP6蛋白;利用纯化后的RV病毒粒子和VP6蛋白分别免疫动物制备特异性多克隆抗体;基于VP6蛋白建立血清中人A组轮状病毒抗体水平的检测方法。方法:（1）将VP6基因连接到p ET30a载体构建重组质粒,鉴定成功后在大肠杆菌系统中进行蛋白表达,22℃低温诱导表达和纯化可溶VP6蛋白,37℃高温诱导制备包涵体VP6蛋白并进行透析复性;（2）将VP6基因连接到p Fast Bac1载体构建重组质粒并在蛋白C端带有his标签,鉴定成功后利用杆状病毒表达系统制备VP6蛋白,使用亲和层析镍柱进行纯化;（3）培养和纯化完整RV病毒粒子,分别以RV和RV VP6蛋白为免疫原,免疫动物获得多克隆抗体,利用间接ELISA法检测制备抗体的效价;（4）以纯化得到的VP6蛋白为包被抗原,建立检测血清中人RV抗体的间接ELISA方法,优化条件后对46份湖南腹泻入院儿童血清样本进行RV抗体水平的检测。结果:（1）利用大肠杆菌表达系统得到包涵体VP6蛋白,包涵体透析复性后仅能得到少量可溶蛋白,复性效率低。利用杆状病毒表达系统表达得到纯度高、免疫原性好的可溶VP6蛋白;（2）利用纯化的RV病毒粒子免疫小鼠得到效价较高的RV鼠多抗,VP6包涵体蛋白免疫兔子制备RV VP6兔多抗,两种多抗均可用于Western Blotting检测,鼠多抗纯度较高且特异性更好;（3）利用建立的间接ELISA法检测46份腹泻儿童血清样本,血清稀释至1:6000后检出率为82.6%。结论:本研究成功表达纯化出A组轮状病毒VP6可溶蛋白,制备得到RV鼠多抗和RV VP6兔多抗,并基于VP6蛋白建立了间接ELISA法用以检测血清中人轮状病毒抗体水平,为轮状病毒检测及疫苗评价相关研究奠定了基础。
其他文献
目的:1.评价针刺、耳穴按压及尼古丁替代疗法等戒烟方法的相对有效性和安全性;2.探讨针刺联合真/假尼古丁贴片、假针刺联合真/假尼古丁贴片等不同干预措施戒烟的临床效果。方法:1.贝叶斯网状meta分析:检索中国知网、中国生物医学数据库（CBM）、Pub Med、Cochrane Library、Embase以及Web of Science数据库中关于针刺、尼古丁替代疗法戒烟的随机对照试验,进行文献筛
金属有机骨架固体（MOFs）材料是一类新兴的多孔有机-无机杂化材料,其金属中心和有机配体通过配位键有序连接形成具有框架结构的晶体材料。同时大多数MOFs的金属中心还会暴露出空余的活性位点,对催化、吸附和药物运输都有着很广阔的研究价值。由于其较大的比表面积和孔道结构可变性,同时易于对其功能进行修饰,金属有机骨架在气体储存和分离方面具有十分大的应用前景。随着当今新能源材料工业化进程的推进,金属有机骨架
目的流感病毒传播迅速,具有季节性,而流感的季节性和传播性往往与气象因素有关,并具有时空特异性。通过分析兰州市2014-2017年流感病例的流行特征,探讨气象因素对流感病例的影响,用时间序列分析的方法构建兰州市流感病例的预测模型,并对2018年1月-2019年12月兰州市流感病例的发生进行预测,为流感的预测和防控提供科学依据。方法收集2014-2017年兰州市流感病例监测资料和2014-2019年的
近年来，听障成人的听力康复受到了越来越多的关注和重视，尤其是在现代康复理念下，成人听力康复在康复评估内容、康复效果评价、康复课程设置等方面较之前有了明显变化。我国成人听力康复在面临困难和挑战中，取得不断进步。
烃类选择氧化是重要的工业转化过程,该反应涉及金属氧化物催化剂晶格氧参与的氧化还原循环,在固相催化剂表面进行气相分子氧的活化与传递是提高选择氧化目标产物的主要途径。气相分子氧基态是三线态氧（3Σ-g）,活化形成单线态氧（1Δg）需要克服94.3 kJ/mol的能垒。气相分子氧一旦活化易导致烃分子深度氧化,生成COx和H2O。因此,选择氧化催化剂研究的关键是寻找有利于分子氧在催化剂表面活化形成选择性氧
随着互联网经济的发展,涌现了多样化的出行方式,可以满足不同群体的出行体验。汽车分时租赁这一交通方式的产生主要可以满足顾客尤其有证无车人群的短途出行需求,相比于私家车其成本更低,相比于网约车和出租车其性价比又更高。随着汽车分时租赁这一新兴交通方式的加入,在位的出租车运营商所占领的市场份额将会被分割,汽车分时租赁运营商和出租车运营商的竞争不可避免地产生了。在此背景下,汽车分时租赁公司与传统出租车公司之
石油作为一种宝贵的化石原料,在国民生产经济中具有重要的作用。但是作为世界第二大经济体,中国的石油资源却相对匮乏,近年对外依存度超过70%,给国家能源安全带来了巨大挑战。而且伴随中国原油市场定价机制的国际化改革,国内油价开始联动调整,使得缺乏影响力的中国石油市场不可避免地受到更多来自世界石油市场的波动和冲击。2018年3月26日,以中质含硫原油为标的资产的原油期货首次在上海国际能源交易中心上市,旨在
异壬醛（INA）是一种广泛应用于各类重要化工产品生产的化工中间体原料,其中一个主要的用途是制备高碳醇增塑剂。INA主要来源于C8烯烃氢甲酰化均相催化体系,此体系虽然具有良好的催化活性、选择性及温和的反应条件,但催化剂难以和反应体系分离、催化剂活性组分流失导致催化剂活性降低等问题制约了均相催化体系工业化的发展。本文设计制备了Fe3O4@Rh、Fe3O4@MO@Rh（M=Zn、Co）磁性催化剂,通过外
目的流感是首个实行全球监测的传染病,也是世界各国公共卫生问题的重点之一。本文通过分析流感病例的流行特征,研究气象因素和空气污染物对流感发病的影响,为武威市相关部门制定流感预防控制措施提供依据。方法从武威市疾病预防控制中心的“传染病网络直报信息管理系统”中导出武威市2015年1月1日-2020年12月31日的流感报告数据;从中国气象数据网收集武威市2015年1月1日-2020年12月31日的气象数据
目的:本研究通过病例对照的研究方法,采用Taq MAN基因分型技术进行EPAS1基因的单核苷酸多态性研究。通过分析氧敏感相关基因EPAS1的多态性与慢性阻塞性肺疾病之间的关联,探讨EPAS1基因与环境的交互作用对COPD的影响,试图探寻COPD早期的潜在诊断标志物,拟从遗传和分子水平为COPD的防治提供分子生物学证据,从而为早期预防及干预该疾病的发生、发展提供科学依据。方法:1.通过病例对照研究设