中药复方化学组成极其复杂,中药复方物质基础研究是中医药现代化的关键。中药复方物质基础的阐明,有助于促进中药学科发展,建立科学规范的中药质量控制标准,加快中药产业国际化的步伐。“液相层析串联多级质谱仪”(LC-MS/MS)分析技术是研究中药复方效应物质基础强有力的工具。该技术具有高效、快速、样品用量少等优点,能同时对复杂的中药组成进行定性和定量分析。本文以整体动物平喘药理为导向,在对组方各味药平喘有效部位进行筛选的基础上,结合现有研究成果和现代制药生产技术,对小儿麻藤定喘方有效成分群的提取分离、纯化工艺进行了研究,运用“LC-MS/MS”分析技术研究小儿麻藤定喘方的物质基础,并采用高效液相色谱法建立有效成分群中君药麻黄平喘有效成分麻黄碱的含量测定方法,有助于建立科学规范的中药质量控制标准,为小儿麻藤定喘创新药物的临床应用与开发奠定了坚实的基础。主要研究内容及结果如下：第一部分组方各味药平喘有效部位的筛选一苦杏仁平喘有效部位的筛选及有效成分的结构鉴定目的：比较苦杏仁不同部位对乙酰胆碱组胺引起的豚鼠哮喘的作用及鉴定有效部位柱分离得到的有效成分。方法：采用乙酰胆碱和组胺混合液致豚鼠哮喘发作,观察哮喘潜伏期。运用先进的LC-MS/MS分析技术鉴定有效成分结构。结果：苦杏仁的正丁醇部位及其柱分离结晶C、D均可明显延长哮喘发作潜伏期。结论：苦杏仁的正丁醇部位是其平喘的主要活性部位,经鉴定,柱分离得到的有效结晶C和D都是苦杏仁苷。二地龙提取物柱层析平喘有效部位的筛选目的：比较地龙提取物柱层析各部位的平喘活性。方法：采用乙酰胆碱和组胺混合液致豚鼠哮喘发作,观察哮喘潜伏期。结果：5%-15%甲醇的乙酸乙酯洗脱部位可明显延长哮喘发作潜伏期。结论：5%-15%甲醇的乙酸乙酯洗脱部位是中药地龙平喘的主要活性部位。三钩藤、僵蚕、甘松平喘有效部位的筛选目的：比较钩藤、僵蚕、甘松不同部位对乙酰胆碱组胺引起的豚鼠哮喘的作用。方法：采用乙酰胆碱和组胺混合液致豚鼠哮喘发作,观察哮喘潜伏期。结果：钩藤、僵蚕、甘松的乙酸乙酯部位均可明显延长哮喘发作潜伏期。结论：钩藤、僵蚕、甘松的乙酸乙酯部位是它们平喘的主要活性部位。第二部分小儿麻藤定喘方有效成分群的水提醇沉工艺研究目的：探讨小儿麻藤定喘方有效成分群的水提醇沉工艺条件。方法：以麻黄碱含量和浸膏得率为指标,采用高效液相色谱法测定麻黄碱的含量,运用正交试验法对水提及醇沉的工艺条件进行优化；采用乙酰胆碱和组胺混合液致豚鼠哮喘发作,观察哮喘潜伏期,通过药效验证最佳工艺。结果：水提最佳工艺为：第一次补足吸水量后加10倍量水浸泡2小时,其余每次加10倍量水,提取3次,每次提取1.5小时；醇沉最佳工艺为：醇沉浓度为60%,浓缩比例为1：1.5,静置时间为24h；按此工艺条件提取的提取物可明显延长哮喘发作潜伏期。结论：优选的工艺稳定、可行。第三部分小儿麻藤定喘方水煮醇沉提取物大孔吸附树脂纯化的活性部位筛选目的：确定小儿麻藤定喘方水煮醇沉提取物大孔吸附树脂纯化的平喘活性部位。方法：采用乙酰胆碱和组胺混合液致豚鼠哮喘发作,观察哮喘潜伏期；采用高效液相色谱法测定君药麻黄有效成分麻黄碱的含量。结果：70%和95%乙醇洗脱部位可明显延长哮喘发作潜伏期；70%乙醇洗脱部位麻黄碱含量为37.14mg/g、95%乙醇洗脱部位麻黄碱含量为2.064mg/g。结论：70%和95%乙醇洗脱部位是小儿麻藤定喘方平喘的主要活性部位。第四部分小儿麻藤定喘方有效成分群的化学成分研究目的：研究小儿麻藤定喘方有效成分群的化学组成。方法：采用先进的LC-MS/MS分析技术对有效成分群进行分析研究。结果：参考相关文献,结合色谱保留时间、紫外吸收光谱、分子量和多级质谱信息等,从有效成分群中初步鉴定了17个化合物,分别是：麻黄碱、钩藤碱、毛钩藤碱、硬帽毛柱木碱、帽杜木碱、甲基麻黄碱、去甲麻黄碱、去氢毛钩藤碱、硬帽毛柱木因碱、柯诺辛、科诺辛B、甘松新酮、甘松香酮、甘松酮、亚油酸、喜果苷、琥珀酸二异丁酯等。结论：建立了小儿麻藤定喘方有效成分群的化学特征谱(包括正、负离子总图、DAD检测光谱图),基本表征了小儿麻藤定喘方的物质基础。第五部分小儿麻藤定喘方有效成分群中盐酸麻黄碱的含量测定目的：建立小儿麻藤定喘方有效成分群中盐酸麻黄碱含量测定的方法。方法：采用HPLC法测定。色谱柱：Aglient TC-C18柱(4.6mm×250mm,5μm),流动相：乙腈-0.1%磷酸水溶液(4：96)；流速：1.0ml/min;检测波长：210 nm；柱温：35℃；进样量：10μl。结果：线性关系良好,r=0.9999,回归方程为Y=1.2738 X+0.0539,线性范围为0.32-0.74μg,平均加样回收率为96.4%(n=6),RSD=1.9。结论：本法简便,准确,专属性强,重现性好,阴性无干扰,为有效成分群的质量控制和评价提供了依据。