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目的:优化胚胎癌细胞P19经RA诱导后向神经方向分化的培养实验条件,并建立稳定表达nestin基因第二内含子报告基因的P19细胞株。
方法:在P19细胞经RA诱导后比较SC、CA-SC和N2-SF三种培养液对神经分化的影响。RT-PCR方法考察nestin在此过程中的变化。用细胞筛选的方法建立表达nestin基因第二内含子报告基因的稳定细胞株,并用荧光素酶测定法检测报告基因的表达变化。
结果:对不同诱导后分化条件的反复比较,在N2无血清培液中,P19细胞的神经分化过程类似于原代培养的神经前体细胞,并能形成发达的神经网络。Nestin在细胞诱导分化前后均有表达,向神经方向分化后表达量有较大增加,并随着分化的成熟下降。建立了稳定表达nestin基因第二内含子报告基因的细胞株,其报告基因的表达与nestin的表达趋势一致。