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食品中反式脂肪酸(TFA)分为加工来源(如油脂的部分氢化和精炼)和天然来源(如反刍动物制品)两大类。加工食品是我国居民膳食TFA的主要来源,TFA膳食摄入特点为以t-C18:2、t-C18:3为主,t-C18:1含量很少。国外膳食中的TFA主要来自于商业氢化油、乳制品和肉类脂肪,以t-C18:1为主,几乎不含t-C18:2、t-C18:3。国外对TFA的营养学评价主要是针对t-C18:1进行的。这与我国居民TFA摄入特点是以t-C18:2和t-C18:3为主有较大差异。我国居民摄入TFA营养学评价仍有待进一步研究。鉴于我国居民反式脂肪酸的摄入特点,研究开展反式亚油酸9t,12t-C18:2体外营养学评价具有非常重要的理论价值和社会价值。论文选择Hep G2细胞为模型,以9c-C18:1,9t-C18:1和9c,12c-C18:2为参照,探讨9t,12t-C18:2对Hep G2细胞的氧化损伤,细胞凋亡以及与动脉粥样硬化(AS)的关系,以期为反式亚油酸与AS的关系提供理论依据。本文选用MTT法考察反式亚油酸对Hep G2细胞存活率的影响,确定反式亚油酸能否诱导Hep G2细胞氧化损伤;分析测定ROS、MDA、SOD、CAT和GSH-Px等相关损伤指标,研究反式亚油酸对Hep G2细胞氧化损伤的影响;通过MTT法检测反式亚油酸与Caspase抑制剂z-VAD-fmk共同作用于Hep G2细胞24 h后细胞存活率的变化,以初步研究9c-C18:1,9t-C18:1,9c,12c-C18:2和9t,12t-C18:2能否诱导Hep G2细胞凋亡;采用流式细胞仪技术进一步检测反式亚油酸能否诱导Hep G2细胞凋亡;通过检测参与细胞凋亡的酶Caspase-3、-8和-9,探讨反式亚油酸诱导Hep G2细胞凋亡的机制;最后采用油红O染色法观察细胞内脂滴的变化,检测Apo-B、TG、T-CHO和与AS相关的基因表达量的变化,阐述反式亚油酸与AS的关系并探索反式亚油酸致AS的机理。具体结果如下:反式亚油酸能够诱导Hep G2细胞氧化损伤。9t-C18:1和9t,12t-C18:2这两种不同饱和度的TFA均能抑制Hep G2细胞的存活;都能诱导Hep G2细胞的抗氧化机能损伤,使细胞大量产生ROS,增加细胞的脂质过氧化物的分解代谢产物MDA的含量,其机制可能是通过降低SOD、CAT和GSH-Px活力,减弱细胞清除自由基能力。表明反式亚油酸损伤Hep G2细胞作用机制之一可能是氧化应激,并且9t-C18:1和9t,12t-C18:2诱导Hep G2细胞损伤的效果基本没有显著性差异(P>0.05)。研究反式亚油酸诱导Hep G2细胞的损伤作用及机制对于了解反式亚油酸和AS的关系有一定的推动作用。Caspase抑制剂z-VAD-fmk能显著抑制9t-C18:1和9t,12t-C18:2诱导的Hep G2细胞存活率的下降(P<0.05)。通过流式细胞仪检测,我们得到9t-C18:1和9t,12t-C18:2能诱导Hep G2细胞凋亡。在凋亡的过程中,Caspase-3、-8和-9凋亡酶均能被激活。Caspase-3的活性能完全被Caspase-8抑制剂z-IETD-fmk和Caspase-9抑制剂z-LEHD-fmk抑制,并且Caspase-9的活性同样能够被Caspase-8抑制剂z-IETD-fmk抑制。表明细胞凋亡可能也是反式亚油酸致AS的反应之一,为反式亚油酸诱导AS机理的研究提供了一定的理论基础。通过反式亚油酸刺激,建立了人肝癌Hep G2细胞体外模型。采用油红O染色法观察细胞内脂滴的变化,并测定细胞中Apo-B、TG和T-CHO的含量以及与CHO逆转运密切相关基因(HMGCR、SR-BI、LDLR等)的表达水平。实验结果发现,反式亚油酸能使Hep G2细胞内脂滴数量显著增多,细胞脂肪变性;可使Apo-B、TG和T-CHO的含量显著升高(P<0.05);上调胆固醇合成限速酶基因HMGCR m RNA的转录,导致CHO含量上升;下调高密度脂蛋白受体(SR-BI),低密度脂蛋白受体(LDLR)和SR-BI发挥功能依赖者PI3K/Akt m RNA的转录,导致HDL-C含量下降,LDL-C含量升高,影响RCT;下调细胞视黄醇受体(RXR)表达水平,减少PPARα/RXR异源二聚体的形成,进而抑制脂质代谢调节者PPARα对其下游基因SR-BI的激活。反式亚油酸通过调控这些与AS密切相关基因的表达,最终推进AS的进一步发生发展。