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目的:补体系统介导的细胞损伤是肾小球疾病发生发展的重要机制之一。苏木作为一种传统中药,具抗氧化、抗肿瘤、抗炎、抗菌和免疫抑制等多种功效。课题组前期研究首次发现原苏木素A对C5b-9介导的足细胞损伤具有保护作用,但其分子机制尚不明确。本研究通过体外构建C5b-9攻击足细胞损伤模型,基于蛋白质组学技术,评价原苏木素A对C5b-9介导的足细胞损伤保护作用及潜在分子机制。方法:构建C5b-9膜攻击复合物足细胞损伤模型,用不同浓度的原苏木素A处理,CCK-8法检测原苏木素A对足细胞增殖的影响,免疫荧光法检测原苏木素A对足细胞标志蛋白Nephrin的表达和细胞定位的影响,流式检测原苏木素A对足细胞凋亡的影响,iTRAQ蛋白质组学方法检测原苏木素A作用后的蛋白质组变化,筛选差异表达蛋白,进行GO功能富集分析和KEGG Pathway富集分析,并对差异表达蛋白进行PPI互作网络分析,揭示原苏木素A对足细胞损伤保护作用的潜在分子机制,同时Western blot方法验证相关差异蛋白的表达变化。结果:(1)足细胞在原苏木素20、40、80、160μmol/L处理组增殖明显,在浓度为80μmol/L时足细胞增殖情况最好,而在C5b-9组和原苏木素10μmol/L处理组增殖受到明显抑制。在C5b-9攻击下,足细胞密度减小,Nephrin表达明显减少;在原苏木素A作用后,Nephrin表达明显高于模型组。空白对照组凋亡率最低,模型组凋亡率最高,与模型组比较,原苏木素20、40和80μmol/L组的足细胞凋亡率均显著降低(P<0.05)。(2)iTRAQ蛋白质组学鉴定到3367个蛋白,筛选获得134个下调表达的差异蛋白和185个上调表达的差异蛋白,共计319个差异蛋白;GO功能富集分析生物学过程主要富集于转录、核糖体RNA合成过程、胞质的翻译、核糖体小亚基的生物合成、核糖体大亚基的生物合成、细胞凋亡负调控、细胞增殖等;细胞组成主要富集于核糖体、核糖体亚基、黏着斑、细胞外泌体、细胞核、细胞质和细胞外基质等;分子功能主要富集于核糖体结构、RNA结合、钙粘蛋白结合细胞-细胞粘附、蛋白复合物结合、蛋白激酶结合和肌动蛋白结合等;KEGG富集到的通路主要有:Ribosome(核糖体)、Focal adhesion(黏着斑)、ECM-receptor interaction(细胞外基质-受体相互作用)、Metabolic pathways(细胞代谢通路)、Oxidative phosphorylation(氧化磷酸化)、Complement and coagulation cascades(补体途径)和Fatty acid metabolism(脂肪酸代谢)等相关信号通路;PPI网络图结果显示,原苏木素A对足细胞损伤的保护作用可能涉及核糖体功能、细胞增殖与细胞周期的调控、补体途径和足细胞蛋白等生物学过程。(3)与空白对照组相比,C5b-9模型组Cav1、Nestin和Carm1蛋白表达水平明显下调,Bax蛋白表达水平明显上调;而与模型组相比,原苏木素A组Cav1、Nestin和Carm1蛋白表达水平明显上调,Bax蛋白表达水平明显下调,与iTRAQ蛋白组检测的结果一致。结论:(1)原苏木素A可以促进足细胞增殖,抑制足细胞凋亡,上调足细胞Nephrin蛋白表达水平,对C5b-9介导的足细胞损伤有显著的保护作用;(2)原苏木素A对足细胞的保护作用可能涉及核糖体功能、细胞增殖、周期和凋亡的调控、补体途径等生物学过程和足细胞相关蛋白的功能。(3)原苏木素A可以上调足细胞Cav1、Nestin和Carm1蛋白表达,下调Bax蛋白表达,可能与抑制足细胞凋亡作用相关,具体分子机制有待进一步探究。