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目的制备HMGB1单克隆抗体并建立HMGB1的竞争ELISA测定方法。方法用bis(sulfosuccinimidyl)suberate制备HMGB1-BSA偶联物(HMGB1-BSA)和HRP标记的HMGB1(HMGB1-HRP)；以完全佐剂乳化的HMGB1-BSA免疫Balb／c小鼠；用50％PEG使小鼠脾细胞与Sp2／0细胞融合；用有限稀释法克隆杂交瘤细胞；用DE52离子交换色层析柱纯化单克隆抗体；用静脉注射链尿菌素法建立大鼠糖尿病模型。结果在120个孔内，发现17个孔内有分泌HMGB1单克隆抗体的杂交瘤细胞生长。对其中A6-Ⅲ孔内杂交瘤细胞用有限稀释法克隆化，共获得7株分泌HMGB1特异性抗体的杂交瘤细胞株。用其中一株杂交瘤(HMGB1-C1株)制备了纯化HMGB1单克隆抗体。利用HMGB1-BSA和HMGB1-HRP建立的竞争ELISA的测定范围为1～320ng／mL，回收率为97～106％，变异系数为2.6～7.3％。用该竞争ELISA测定正常和糖尿病大鼠血清HMGB1水平发现糖尿病大鼠血清HMGB1水平显著高于正常大鼠。结论以HMGB1单克隆抗体建立的竞争ELISA有望成为一种具有灵敏度高、特异性强，重复性好，操作简便和快速的测定方法。