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研究背景与目的以色列Neurim Pharmaceuticals Ltd.新近研发的Neu-p11，不仅是褪黑素（Melatonin，Mel）非选择性受体激动剂，而且具有与Mel类似的结构、相近的生物学功能，两者均可显著抑制高糖高脂喂食大鼠体重的增加，减少脂肪细胞内甘油三酯（triglyceride，TG）蓄积，改善胰岛素抵抗（insulin resistance，IR）。脂肪细胞内TG含量增高与肥胖、胰岛素抵抗密切相关。作为经典脂肪分解酶的激素敏感脂肪酶（Hormone sensitive lipase，HSL）以及新近发现的脂肪组织甘油三酯酶(Adiposetriglyceride lipase，ATGL)均是脂肪动员的关键酶，在脂肪组织TG分解代谢中发挥至关重要的作用，且在鼠白色脂肪组织（white adipose tissue，WAT）促使TG水解的酶中，95%以上均为ATGL与HSL发挥作用效应。另有实验证实：与胰岛素敏感组相比，具有胰岛素抗性的细胞内ATGL与HSL的蛋白及mRNA水平均降低。本课题旨在观察Neu-p11干预前后，高糖高胰岛素（high glucose and insulin，HGI）诱导的3T3-L1胰岛素抵抗脂肪细胞中ATGL、HSL蛋白表达的变化，对脂肪细胞内TG含量的影响及两者的相关性，同时对产生上述效应的相关机制做深层次的探讨。方法（1）3T3-L1脂肪细胞的诱导、分化：经典的“鸡尾酒”法（0.5mM IBMX，1μMDEX，10μg/ml INS）诱导3T3-L1前脂肪细胞分化为成熟的3T3-L1脂肪细胞，油红O染色法鉴定脂肪细胞形态及3T3-L1前脂肪细胞分化程度。（2）胰岛素抵抗模型的制备：高糖高胰岛素孵育脂肪细胞24小时，葡萄糖氧化酶法间接检测糖消耗量验证胰岛素抵抗细胞模型构建是否成功。（3）甘油三酯酶法及葡萄糖氧化酶——过氧化物酶法分别检测在Luzindole存在与否的前提下，Neu-p11干预前后各组脂肪细胞中甘油三酯沉积量及培养基内葡萄糖含量。（4）Western Blot检测高糖高胰岛素作用前后脂肪细胞ATGL、HSL蛋白的表达变化及Neu-p11干预（Luzindole作用与否）对上述蛋白表达的影响。结果3T3-L1前脂肪细胞经“鸡尾酒”法诱导10天后，通过油红O染色可见90%以上细胞呈现明显的“戒环样”结构：细胞呈圆形，内含大量脂滴，且呈环形排列，即表明已分化为典型的成熟脂肪细胞。实验结果显示：高糖高胰岛素联合作用3T3-L1脂肪细胞24h，明显降低细胞对葡萄糖的消耗量，成功诱导其发生胰岛素抵抗。另外，实验结果还表明：与Con组相比，HGI处理脂肪细胞导致细胞脂质积聚，TG含量明显增高，细胞内ATGL、HSL蛋白表达下调；经Neu-p11干预，与Mel具有类似效应，可以明显促进胰岛素抵抗脂肪细胞对葡萄糖的摄取，抑制细胞内脂质积聚，降低细胞内TG含量，上调ATGL及HSL蛋白表达，但并不影响3T3-L1脂肪细胞内TG水平；MT2竞争性拮抗剂Luzindole（LZD）预处理后，明显抑制了Neu-p11/Mel的上述效应，且差异均具有统计学意义。结论Neu-p11能显著抑制胰岛素抗性脂肪细胞脂质蓄积，降低其TG含量，改善IR，与其通过MT2受体依赖性方式上调IR脂肪细胞中ATGL和HSL蛋白表达相关。