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目的:本研究拟对我院2018年1月-2020年6月收集的耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌（carbapenem-resistant klebsiella pneumoniae,CRKP）进行耐药性,表型及基因型检测,了解我院CRKP耐药现状及主要耐药机制,为临床精准用药提供依据;比较RAPIDEC?CARBA NP、m CIM与e CIM联合实验、胶体金免疫层析法及PCR检测这几种实验室检测碳青霉烯酶方法的结果并总结在临床中如何应用;通过对wzi基因型的检测,对临床分离的产KPC-2型耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌进行荚膜血清型K型推断,了解我院产KPC-2型耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌的荚膜血清型分布,对这些耐药菌中是否同时存在高毒力菌株进行筛查,从而对院感实施提供实验依据。研究方法:收集2018年1月-2020年6月中国医科大学附属第一医院门急诊及住院患者临床标本分离出的肺炎克雷伯菌共1415株,同一患者仅保留第一株菌。所有标本经VITEK-MS菌种鉴定,全自动微生物分析系统VITEK2及K-B纸片扩散法进行药敏试验后,随机选取47株除痰标本外非重复CRKP进行进一步研究。利用聚合酶链反应（polymerase chain reaction,PCR）及胶体金免疫层析法对常见碳青霉烯类耐药基因（KPC,NDM,IMP,VIM,OXA）进行基因型检测。利用RAPIDEC?CARBA NP及m CIM与e CIM试验对CRKP进行碳青霉烯酶表型检测。对实验室检测碳青霉烯酶的表型检测方法及基因检测方法的结果进行比较。利用PCR方法对产KPC-2型CRKP及选取的9株碳青霉烯类敏感的肺炎克雷伯菌（Carbapenem-sensitive Klebsiella pneumoniae,CSKP）进行wzi分型。结果:1、1415株肺炎克雷伯菌对亚胺培南和美罗培南的耐药率分别为14.5%,14.7%,对哌拉西林/他唑巴坦、阿米卡星、妥布霉素的耐药率均＜20%,整体CSKP与CRKP菌株药敏结果可看出,除替加环素（P＞0.05）外,CRKP对18种常见抗生素的耐药性均明显高于CSKP,差异有统计学意义（P＜0.001）。并且CRKP呈现多重耐药,对于青霉素类、头孢菌素类及其抑制剂复合物、亚胺培南、美罗培南耐药率均接近于100%,对喹诺酮类、氨基糖苷类药物耐药率均＞85%,复方新诺明耐药率较低（47.6%）,对替加环素耐药率最低（6.9%）。从KPC-2型CRKP的MIC50/MIC90分布情况来看,亚胺培南与美罗培南呈现出高水平耐药,环丙沙星的MIC50/MIC90最低,为＞=4/4μg/ml。携带bla NDM的CRKP仅有两株,对氨曲南、阿米卡星耐药率相对减低（50%）,对妥布霉素、替加环素的耐药率为0%。2、47株CRKP中,43株检测出携带碳青霉烯耐药基因,4株耐药基因检测结果为阴性;43株产碳青霉烯酶菌株中以产KPC-2为主（n=41,87.23%）,共2株携带NDM-5（n=2,4.26%）,未检测出携带有IMP,VIM,OXA以及同时携带有KPC+NDM的菌株。胶体金免疫层析法检测基因型结果与PCR结果一致率为100%。3、RAPIDEC?CARBA NP检测47株CRKP,其中45株试验结果阳性,阳性率为95.74%（45/47）,2株结果不确定。47株CRKP中46株菌株m CIM试验结果阳性,阳性率为97.87%（46/47）,1株结果提示阴性。46株m CIM试验阳性的CRKP中,5株e CIM试验结果阳性（产金属酶）。在明确基因型的43株菌株中,RAPIDEC?CARBA NP的敏感性为100%（43/43）;m CIM与e CIM联合试验中,产KPC-2型CRKP检出39株,敏感性为95.1%（39/41）;对2株产NDM-5型CRKP全部检出阳性,敏感性为100%（2/2）。4、41株KPC-2型耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌共分出9种wzi分型,共39株通过wzi分型得到其对应的荚膜血清型,检出率为95.12%。其中主要为wzi209（K47）共25株,占比60.98%;其次wzi64（K14/K64）共5株,占比12.20%;wzi100（K10）共4株,占比9.76%;wzi273（K30）共2株,占比4.88%;wzi84（K28）、wzi149（K62）、wzi19（K19）各1株,占比均为2.43%;wzi173、wzi538各1株,未在数据库中找到对应的荚膜血清型。41株KPC-2型CRKP未检出高毒力菌株。9株敏感株全部测出wzi分型并找到其对应的荚膜血清分型,检出率100%。其中wzi1（K1）、wzi2（K2）各2株,其次wzi57（K57）、wzi433（K35）、wzi206（K57）、wzi29（K41）、wzi64（K14/K64）各1株。9株敏感对照菌株中高毒力菌株占66.67%。结论:1、CRKP对临床常见抗生素具有高耐药及多重耐药特点,对替加环素耐药率较低。2、我院CRKP的耐药机制主要为产碳青霉烯酶,主要产酶基因型为KPC-2。3、胶体金免疫层析法、RAPIDEC?CARBA NP、m CIM与e CIM联合试验均对碳青霉烯酶具有良好的检出能力,日常检测中胶体金免疫层析法可以作为碳青霉烯酶型初筛的首选,对临床常见CRKP进行基因分型,针对胶体金法无法分型的情况,可利用RAPIDEC?CARBA NP及m CIM与e CIM试验进行补充试验。4、目前我院KPC-2型CRKP主要为wzi209,K47型,尚未发现高毒力菌株。